22、国内外学者动物实验、流行病学调查、临床病例研究，证实草甘膦“致畸”
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证据
1、世界粮农组织/世界卫生组织农药残留转基因组联合会议1994年报告证实“草甘膦原药”致大鼠畸形：“胸骨骨化减少”！
证据01（1994年）：世界粮农组织食物与环境中农药残留专家组与世界卫生组织农药残留专家组联合会议（JMPR）发布《对化学安全性国际计划环境健康标准159：草甘膦》确认：
7.5.1 致畸研究
在妊娠第6-19天，每天以0、300、1000和3500 mg/kg体重的剂量通过管饲法向怀孕的Charles River COBS CD大鼠施用草甘膦原药（Glyphosate technical）。3500 mg/kg剂量组观察到以下效果：软便、腹泻、呼吸窘迫、鼻涕红、活动减少、死亡率增加（处理结束前死亡6/25孕鼠）、生长迟缓、增加早期吸收的发生率、植入总数和活胎儿总数的减少、胎儿数量的增加以及胸骨骨化的减少。在较低剂量水平下，没有这些作用。 这项研究中的未观察到负面作用水平（NOAEL）为每天1000 mg/kg体重（IRDC，1980b）。
在荷兰belted兔中，从妊娠第6-27天每天服用0、75、175和350 mg/kg体重（通过管饲法）剂量草甘膦进行测试。在孕鼠中，大剂量组腹泻和软便的发生率增加，中等剂量组也有所增加。仅高剂量组鼻分泌物的发生率增加。在研究过程中，中剂量组和高剂量组中分别有2个和10个孕鼠因未知原因死亡。 这项研究中的未观察到负面作用水平（NOAEL）为每天175 mg / kg体重（IRDC，1980c）。
Environmental Health Criteria 159 : Glyphosate, International Programme on Chemical Safety, By Group of Experts of United Nations Environment Programme, International Labour Organisation, and World Health Organization,Published by World Health Organization, Geneva,1994
“环境健康标准159：草甘膦”，对化学安全性国际计划, 联合国环境计划、国际劳工组织，世界卫生组织专家组，出版者：世界卫生组织，日内瓦，1994
http://www.inchem.org/documents/ehc/ehc/ehc159.htm#SectionNumber:7.3
2、中国学者1982年“草甘膦对小白鼠的致畸試验”研究证实“草甘膦原药”致畸
证据02（1982年3月）：《贵阳医学院学报》发表贵阳医学院农药毒理研究组《除草剂“草甘膦”毒性研究资料》确认：
草甘膦对小白鼠的致畸試验（摘要）
组织胚胎学教研室:覃国芳、姜障蓉、许庭良、梁文妹
目前关于有机磷农药能导致实验动物妊娠障碍的报道屡见不鲜。为判断草甘麟的胚胎毒作用和有无致畸作用，我们进行本实验。
试验用药：由省化工研究所提供含有效成份 96.6% 的纯品，为白色粉末状物质，实验时用精制淀粉配成不同浓度的混悬液。
采用2月龄昆明小白鼠，雌雄按2 : 1交配，取有阴栓母鼠100只随机分为五组：草甘麟三个剤量组（分别为80，420，1050mg/kg）,阴性对照组（蒸馏水）及阳性对照组（六六六80 mg/kg），每组20只，于器官发生期（妊娠第6~14天）灌胃， 给药体积为2ml/kg，给药期间，每3日称母鼠体重一次，于妊娠第17~18天剖腹，观察并记录着床数、活胎数、死胎数、吸收胎数；检查各胎鼠外形：测量胎长、总胎重、胎盘重、母鼠肝重。收活胎鼠分别进行固定及染色后，观察内脏器官及全身骨骼发育。对各组母鼠体重、胎重及着关数用t测验处理，死胎、吸收胎及骨化异常数用卡方处理。
结果：草甘麟三个剂量组的母鼠体重增长数、活胎数、死胎数、吸收胎数及胎长均与对照组相接近，着床数则高于对照组，仅420mg/kg组胎重略低（P<0.05），第五节胸骨骨化匹缓数较高（P<0.01）与对照组有显著差异。内脏检査未见畸形。外形检查，草甘麟80mg/kg组及阴性对照组各出现1例6趾胎鼠。而六六六（80mg/kg）组母鼠体重增长数、活胎数、胎长、胎重均低于对照组，死胎数，骨化迟缓数明显增多（P<0.01）与对照组有很显著差异。说明六六六有较显著的胚胎毒作用，而草甘麟对小臼鼠的胚胎毒作用很轻微。
小结：草甘麟于器官发生期给小白鼠灌胃，420mg/kg组有轻微胚胎毒作用，三个剂量组对小白鼠基本无致畸作用。
朱延韦、蒋宪瑤，除草剂“草甘膦”毒性研究资料，贵阳医学院学报，1982(3)
http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-GYYB198203006.htm
3、国外学者动物实验研究证实草甘膦除草剂配方制剂“致畸”
证据03（2003年4月）：《毒理学通讯》（Toxicology Letters）发表巴西Rio Grande do Sul联邦大学（(UFRGS）圣保罗大教堂药理学系、巴西Parana联邦大学生物科学研究所药理学系Eliane Dallegrave et al.《草甘膦除草剂农达（Roundup）对Wistar大鼠的致畸潜力》确认：
这项研究的目的是评估在巴西商业化的除草剂草甘膦（Roundup）对Wistar大鼠的致畸性。从怀孕的第6天到第15天，用水或500、750或1000 mg / kg草甘膦对孕鼠进行口服处理。在怀孕的第21天剖腹产，并记录黄体数、着床部位，活着的和死亡的胎儿以及吸收。确定胎儿的体重和性别，并检查胎儿的外部畸形和骨骼变化。拆除孕鼠的器官并称重。结果表明，用1000 mg / kg草甘膦处理的孕鼠死亡率为50％。在对照组、500、750和1000 mg / kg草甘膦组中，分别观察到15.4%、33.1%、42.0%和57.3％的胎儿有骨骼改变。我们可能得出的结论是，草甘膦-农达对孕鼠有毒并诱导胎儿骨骼发育迟缓。...
3.2 胎儿变量
对照组的胎儿雄:雌性别比为0.94:1，接受草甘膦500、750和1000 mg / kg的组雄:雌性别比分别为1.06:1、1.01:1和1.5:1。尽管接受最高剂量处理组的性别比例最高，但各组之间均未观察到统计学上的显着差异（P = 0.889，一种方差分析）。
仅两个草甘膦组显示胎儿具有外部畸形，低剂量组（500 mg / kg）的比率为2.0％，中剂量组（750 mg / kg）的比率为0.6％。除750 mg / kg组中的一只胎儿在怀孕开始时停止发育且未被吸收外，大多数动物都显示全身性水肿（anasarca）。在所研究的四组中，外部畸形率没有显着差异（P = 0.724，X2-检验）。
关于骨骼变化的总百分比，暴露于草甘膦除草剂农达的处理组与对照组相比有显着差异（PB / 0.001，x2-检验）。对照组和500、750和1000 mg / kg草甘膦组的胎儿发生改变的百分比分别为15.4%、33.1%、42.0%和57.3%。观察到最常见的骨骼改变是不完整的骨骼骨化和囟门增大（表3），与对照组相比，在实验组中发生的频率更高（PB / 0.001，x2-test）。
对照组中0.6％动物出现肋骨畸形、肋骨未骨化和股骨短，但在草甘膦处理组中未观察到。
在500mg / kg的草甘膦处理组中，不完全骨化和二侧胸骨的发生率较高。 仅在这一组中发现肱骨不完全骨化和骨融合（分别为2.7％和0.7％）。
某些骨骼改变仅发生在750 mg / kg草甘膦处理过的孕鼠的胎儿中。 胸骨畸形的发生率为11.7％（PB / 0.001，x2-检验，与其他组相比），回肠弯曲和前爪指骨发育不良的发生率分别为2.5％和1.9％（P = 0.05，x2- 测试）。在1.2％的动物中观察到顶壁骨化、枕骨和颈椎不完全骨化、下颌骨短、肋骨融合和锁骨弯曲（P = 0.05，x2-检验）。发生颧缘畸形、颈椎不齐或哑铃状椎骨、波浪状胸骨、锁骨不规则、锁骨畸形、肩骨畸形，尺骨/干双骨骨化不完全、掌骨未骨化和股骨弯曲，发生率为0.6％（P = 0.05，x2-test） 。
在1000 mg / kg草甘膦处理组中，有1.3％的胎儿出现了颈椎和胸椎等畸形（P = 0.05，x2-test），但在其他任何组中均未观察到。
表3列出了在本研究中分析的两个或多个组中发生的骨骼变化的百分比。 在500和750 mg / kg草甘膦组中，两壁间壁和未骨化后指骨的发生率明显更高（与对照组相比，P = 0.001，x2检验）。 在750和1000 mg / kg草甘膦组中，鳞状骨化不完全和尾椎骨缺失更为常见（与对照组相比，P = 0.001，x2-test）。......
讨论
所有草甘膦除草剂农达剂量组中，观察到一些身体结构（例如头骨、胸骨和四肢（特别是后爪））中骨化延迟的迹象。
尽管在没有处理的情况下，骨化延迟可能与体重和/或大小有关（Souza et al., 1997），但在这项研究中，草甘膦除草剂农达处理组的这种改变的频率明显增加。但是，这种改变与体重或大小无关。与对照组相比，处理组中多种变化的发生率明显更高，但未显示剂量相关的模式。但是，骨骼的发育迟缓，例如颅骨骨化不全和囟门增大，表现出剂量相关的反应。
根据WHO（1994）列举的研究，从怀孕的第六天到第19天，每天向怀孕的Charles River COBS CD大鼠施用相当于每天3500 mg / kg草甘膦原药的剂量水平，从而导致软便、腹泻、嘎嘎声呼吸、红色鼻涕和活动减少、孕鼠死亡率增加（在治疗期间为24％）、发育迟缓、早期吸收的发生率增加、植入和存活胎儿的总数减少以及胸骨骨化减少的胎儿数量增加（WHO, 1994）。尽管尚不清楚其确切的毒性机理，但众所周知，孕鼠在孕期暴露于农用化学品（如草甘膦）会在孕鼠及其胎儿的肝脏酶，以及心脏和大脑中引起多种功能异常（Daruich et al., 2001）。
在这项研究中观察到的母体毒性表明，由Adam等人确定，在巴西商业出售的农达制剂比草甘膦原药更具毒性（Adam et al., 1997; Dallegrave et al., 2002）。两项研究均表明，商业制剂中存在的表面活性剂比草甘膦具有更高的毒性。世卫组织的报告尽管提到某些生殖性迹象，如早期吸收、减少的植入位点和活胎数量减少与暴露于3500 mg / kg草甘膦原药相关，但在本研究中，在暴露于草甘膦商业制剂1000 mg / kg时未观察到这些生殖性影响。这可能是因为草甘膦商业制剂中的其他成分直接影响了孕鼠的系统器官，所以在1000 mg / kg的草甘膦中未显示出生殖性作用。但是，在所有草甘膦除草剂农达暴露组中观察到胎儿出现骨骼改变的频率显着增加，表明这些改变与母体毒性没有直接关系，其影响可能与胎儿骨骼发育有关。
本研究报道的骨骼发育迟缓表明，草甘膦除草剂农达的作用比草甘膦原药的作用更明显（WHO, 1994）。与草甘膦原药相比，此处报道的较高的母体毒性可能与商业配方中其他成分的存在有关，例如表面活性剂聚氧乙烯胺（Adam et al., 1997; Dallegrave et al., 2002）。正如Williams等人报道的那样（Williams et al. 2000），尽管事实表明该研究中使用的剂量在正常情况下也永远不会对应于人体暴露水平，与成年或儿童暴露的草甘膦和聚氧乙烯胺水平（接触边际分别为5420、3370和461 577），该结果表明，商业制剂对大鼠骨骼系统的潜在风险增加。为了更好地理解这一事实，应该进行额外的研究以确定商业制剂对胎儿骨骼系统的作用机理，因为人类也可能接触这种商业制剂。
ElianeDallegraveet al., The teratogenic potential of the herbicide glyphosate-Roundup® in Wistar rats. Toxicology Letters, 30 April 2003; 142(1-2) p45-52
ElianeDallegraveet al.,草甘膦除草剂农达（Roundup）对Wistar大鼠的致畸潜力。
毒理学通讯。2003年4月30日；142(1-2) p45-52
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0378427402004836
证据04（2003年3月）：《环境污染毒理学学报》（Bull. Environ. Contam. Toxicol.）发表阿根廷国立湖泊研究所、阿根廷Ciudad大学生物化学与生物学学院卫生高中、阿根廷自然科学与土地测量学院R. C. Lajmanovichet al《暴露于草甘膦制剂的Scinax nasicus蝌蚪的致死率和畸形》确认：
这项研究的目的是在实验室条件下，研究商业草甘膦制剂（GLY-F）在阿根廷S. Nascus蝌蚪中的存活和幼虫畸形的急性毒性。...
S. Nasicus蝌蚪（250个体，18-24阶段：Gosner 1960）是从阿根廷泛洪巴拉那河（31o 42′S； 60o 34′O，阿根廷巴拉那）的一个临时池塘收集的，并保持在实验室条件下。...
被测产品为除草剂GLYFOS，含48％草甘膦异丙胺盐和惰性成分表面活性剂POEA（聚氧乙胺）的商业配方（ESP 2001）。 在该项急性毒性存活试验中，使用的浓度为：3.07、3.84、4.8、6和7.5 mg 草甘膦除草剂/L。 ...
结果和讨论
在草甘膦除草剂 为3.07 mg/ L的情况下，48小时的死亡率比对照组低，但不显着（图1）。 在3.84至7.5 mg/L范围内，在48小时的存活率较低。在所有浓度下96小时均检测到死亡率升高。 96小时LC50比24小时LC50低1.8倍，表明延长暴露时间时草甘膦除草剂毒性增加（表1）。 根据Pauli和Berril的研究（Pauli and Berril, 1996），低浓度的草甘膦除草剂会引起蝌蚪的毒性，从而模仿典型的农业应用后地表水中可能出现的浓度。
在本研究中，使用草甘膦除草剂处理的蝌蚪的48小时LC50为3.62 mg/L。Mann和Bidwell（Mann and Bidwell, 1999）发现其浓度高于澳大利亚青蛙（Crinia insignifera，Heleoporus eyrei，Limnodynastes dorsalis和Litoria moorei）对蝌蚪的浓度（48小时LC50：8.1-32.2 mg GLY /）。 几位作者指出，两栖动物之间和内部在农药耐受性方面存在显着差异（Bridges and Semlitsch 2000）。
在所有测试中均发生幼虫发育不良（颅面和口腔畸形、眼部异常和弯曲的尾巴弯曲）（图2），并随着时间和草甘膦除草剂浓度的升高而增加。将这些影响合并到所有外部畸形百分比中，并列于表2。在暴露于3.07 mg / L草甘膦除草剂一天的情况下，畸形很小，而在7.5 mg / L的草甘膦除草剂水平下，畸形几率大于90％。这项测试证实了草甘膦除草剂对蝌蚪的畸形影响。
R. C. Lajmanovichet al., Induction of Mortality and Malformation in Scinax nasicusTadpoles Exposed to Glyphosate Formulations. Bull. Environ. Contam. Toxicol. March 2003; 70:612–618
R. C. Lajmanovichet al.，暴露于草甘膦制剂的Scinax nasicus蝌蚪的致死率和畸形。
环境污染毒理学学报。2003年3月；70:612–618
https://link.springer.com/article/10.1007/s00128-003-0029-x
证据05（2003年4月）：《毒理学通讯》（Toxicology Letters）发表巴西南Rio Grande do Sul州联邦大学（UFRGS）健康基础科学研究所药理学系、巴西Parana联邦大学理工学院生物科学研究所药理学系ElianeDallegraveet al.《草甘膦除草剂农达（Roundup）在Wister大鼠中的致畸潜力》确认：
这项研究的目的是评估草甘膦除草剂农达（Roundup®）（在巴西商业化）对Wistar大鼠的致畸性。从怀孕的第6天到第15天，用水或500、750或1000 mg / kg草甘膦对大坝进行口服处理。在怀孕的第21天进行剖腹产，并记录黄体数、着床部位、活着的和死亡的胎儿以及吸收。确定胎儿的体重和性别，并检查胎儿的外部畸形和骨骼变化。
采取胎儿的器官并称重。结果表明，用1000 mg / kg草甘膦处理的胎儿的死亡率为50％。 分别在500、750和1000 mg / kg草甘膦对照组的的胎儿中观察到骨骼改变分别为15.4％，33.1％，42.0％和57.3％。
仅两个草甘膦组显示胎儿具有外部畸形，低剂量组（500 mg / kg）的发生率为2.0％，中剂量组（750 mg / kg）的发生率为0.6％。...
观察到的最常见的骨骼改变是颅骨骨化不完全和囟门增大（表3），与对照组相比，在实验组中发生的频率更高（P B / 0.001，x2-test）。
在500 mg / kg的草甘膦组中，不完全骨化和二部分胸骨的发生率较高； 仅在该组中观察到肱骨不完全骨化和颧骨融合（分别为2.7％和0.7％）。...
我们可以结论，草甘膦除草剂农达（Roundup®）对胎儿有毒并诱导胎儿骨骼发育迟缓。
ElianeDallegraveet al., The teratogenic potential of the herbicide glyphosate-Roundup® in Wistar rats. Toxicology Letters, 30 April 2003; 142(1-2) p45-52
ElianeDallegraveet al.，草甘膦除草剂农达（Roundup）在Wister大鼠中的致畸潜力。毒理学通讯，2003年4月；142(1-2) p45-52
https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0378427402004836
证据06（2004年4月）：《细胞生物学》（Biology of the cell）发表法国国家科学研究中心细胞周期与发育Roscoff生物站、法国皮埃尔和玛丽居里大学Julie Marcet al.《草甘膦除草剂影响细胞周期调制》确认：
细胞周期失调是肿瘤细胞和人类癌症的标志。细胞周期检查点的失败会导致基因组不稳定，并从最初受影响的细胞中继发癌症。全球使用的草甘膦作为活性剂的Roundup 3plus除草剂产品引起人类细胞周期功能异常，这是根据人类对海胆胚胎的第一个细胞分裂的分析判断得出的，引起了对于草甘膦除草剂对人类健康影响的关注。
由于诸如癌症之类的细胞周期疾病是由独特细胞的功能障碍导致的（Molinari, 2000; Stewart et al., 2003），因此评估影响细胞的草甘膦的阈值剂量引起了人们的兴趣。 从草甘膦除草剂Amega、Cosmic和Cargly制剂诱导细胞周期紊乱的浓度约为1 mM，农达（Roundup）制剂的诱导浓度为8-12 mM，当存在于Amega，Cosmic和Cargly中时，足以引起至少一个细胞功能障碍的草甘膦的不利剂量阈值估计为10 µM；当存在于农达Biovert制剂（Roundup Biovert）或农达3plus（Roundup 3plus）中时，足以引起至少一个细胞功能障碍的草甘膦的不利剂量阈值估计为80-120 µM。
由于制造商建议以40 mM的草甘膦浓度喷洒制剂产品，因此喷雾液滴中存在的产品浓度比对细胞周期的不利浓度阈值高500至4000倍。
因此，在草甘膦除草剂喷雾时近吸入明显引起人体健康问题。我们的实验很早前就发现了人类的长期风险，因为癌症可能源于初始应激后数年或数十年的单个细胞（Molinari, 2000; Stewart et al., 2003）。
我们目前的研究结果表明，草甘膦除草剂与细胞周期失调之间存在分子联系，它们没有建立癌症发展的直接联系。 但是，最近的流行病学方法表明，草甘膦除草剂农达可能与农民中非霍奇金淋巴瘤的发生频率升高有关（De Roos et al., 2003），这强烈表明，对于预防化学品的不利影响，利用海胆早期发育早期发现化学品的不良反应可能非常有用。
Julie Marcet al., Glyphosate‐based pesticides affect cell cycle regulation.
Biology of the cell. April 2004; 96(3) p245-249
Julie Marcet al.，草甘膦除草剂影响细胞周期调制。细胞生物学。2004年4月；96(3) p245-249
https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1016/j.biolcel.2003.11.010
证据07（2010年9月）：《国际农业与生物学杂志》（Int J of Ag and Biology）发表斯里兰卡Peradeniya大学动物学系和科学研究所、化学系；印度海得拉巴国际水管理研究所Jayawardena UA团队《农药对沙漏树蛙（Polypedates cruciger）急性和慢性暴露的的毒性》确认：
在实验室条件下，研究了四种常见的农业农药，即毒死蜱、乐果、草甘膦和敌稗对沙漏树蛙急性和慢性暴露的畸形的存活、生长和发育的直接影响。
草甘膦除草剂（Roundup®或Glyphosate®）溶解于水中后（例如，对于椰子种植园1.44 kg/公顷）施用。...
长期接触生态相关浓度农药：孵化后五天的蝌蚪（Gosner阶段25-26；Gosner, 1960）在装有2 L农药溶液类似玻璃罐（15 x15 x25 cm）中接触生态相关浓度的农药。...乐果，草甘膦和敌稗的浓度系列分别为0.25、0.50、0.75和1.00 ppm，这是根据相关研究检测的井水（草甘膦浓度高达10 ppm；Navaratne & Devasurendra，未公开结果）以及农药登记处的信息有关水井水中草甘膦浓度的最新信息。 ...
蝌蚪孵化后10天（Gosner阶段27），孵化后30天（Gosner阶段31）和进化变态时记录了畸形。畸形百分比的计算方法是：每个阶段的畸形个体数除以该特定阶段的存活个体数。死亡的畸形个体也包括在畸形个体的数量中，因为某些畸形会导致直接死亡。进化变态时时，将所有畸形的个体麻醉并保存在5％的福尔马林中。
长期暴露于生态相关剂量下的存活百分比低于对照组（草甘膦=75％，乐果=77.5％，毒死蜱=80％和敌稗=85％，对照=95.5％），而且浓度显着影响。
暴露的蝌蚪要花更多的时间才能进化，并且大小比对照组的蝌蚪要小得多。它们还出现了高频率的畸形（草甘膦= 69％，乐果= 64％，毒死蜱 = 60％，敌稗= 45％）。 畸形主要是驼背，脊柱侧弯（弯曲），皮肤溃疡和水肿。
这项研究提供了关于农药对斯里兰卡特有两栖动物物种影响的比较研究的第一个经验证据，并强调了调查淡水生态系统中化学农药水平及其对非目标生物的影响的重要性
Jayawardena UAet al., Toxicity of agrochemicals to common hourglass tree frog (Polypedates cruciger) in acute and chronic exposure. Int J of Ag and Biology. Sep 2010. 12(5):1560-853012
Jayawardena UAet al.，农药对沙漏树蛙（Polypedates cruciger）急性和慢性暴露的的毒性。国际农业与生物学杂志。2010年9月。12(5):1560-853012
https://agris.fao.org/agris-search/search.do?recordID=PK2011000179
证据08（2010年10月）：《毒理学化学研究》（Chemical Research in Toxicology）发表阿根廷布宜诺斯艾利斯大学医学院胚胎分子学实验室Paganelli, A. Carrascoet A.E al.《草甘膦基除草剂通过损伤损害视黄酸信号对脊椎动物造成畸形影响》确认：
广谱除草剂草甘膦在世界范围内广泛用于农业。关于草甘膦对环境和人类健康可能产生的不利影响一直存在争议。
关于使用草甘膦类除草剂（GBH）地区发生胎儿神经缺陷和颅面畸形的报道，使我们采取了胚胎学方法来探索低剂量草甘膦对发育的影响。将非洲爪蟾胚胎与1/5000稀释的商业草甘膦类除草剂孵育。
处理后的胚胎高度异常，头部和神经嵴发育明显改变，前后轴（A-P）缩短。神经嵴标志物的改变后来与蝌蚪期颅软骨的畸形相关。注射纯草甘膦的胚胎表现出非常相似的表型。
此外，草甘膦除草剂在鸡胚中产生相似的作用，显示出菱形结构域逐渐丧失，视泡减少和小头畸形。这表明草甘膦本身是所观察到的表型的原因，而不是表面活性剂或商业制剂的其他组分。
一项报告基因检测（reporter gene assay）显示，草甘膦除草剂处理可提高非洲爪蟾胚胎中的内源视黄酸（RA）活性，与RA拮抗剂共同治疗可挽救草甘膦除草剂的致畸作用。因此，我们得出的结论是，草甘膦除草剂产生的表型主要是内源性类维生素A活性增加的结果。这与来自胚胎背中线的音猬因子（Shh）信号的减少，otx2表达的抑制以及脑神经干扰发育的破坏相一致。
草甘膦对脊椎动物胚胎形态发生的早期机制的直接影响使人们担心在农业领域接触草甘膦除草剂的人群中人类后代的临床发现。重要的是要注意，在草甘膦除草剂（GBH） / 转基因生物（GMO）安全评估阶段提供的大部分数据是由行业提供的。 鉴于最近在许多学术实验室中观察到低剂量效应的内分泌干扰物领域的历史，但在行业资助的研究中却没有发现这种效应[1,2]，很明显，为了充分评估农用化学药品对人类健康的影响的作用，必须有一个合理的独立研究文献库。当涉及重大经济利益时，这一点尤其重要。
越来越多的证据引起人们对草甘膦除草剂对生活在大量使用除草剂地区的人们的影响的关注。 在怀孕期间暴露于除草剂的妇女所生的后代具有先天畸形，包括小头畸形、无脑畸形和颅骨畸形（3）。
塞拉利尼（Seralini）的小组对该主题做出了相关贡献[4]。他们表明，草甘膦除草剂在JEG3胎盘细胞的培养物中起内分泌干扰物的作用，降低了CYP19酶（细胞色素p450芳香化酶的重要组成部分）的mRNA水平并抑制了其活性。CYP19负责雄激素不可逆地转化为雌激素。 草甘膦除草剂农达可以破坏芳香化酶的活性。重要的是，草甘膦的活性成分与纯化的酶的活性位点相互作用，并在细胞培养中发挥作用，而草甘膦除草剂农达制剂中的其他成分可促进微粒体的产生，从而可能增加草甘膦的生物利用度[4]。草甘膦通过细胞膜的渗透和随后的细胞内作用可通过佐剂如表面活性剂大大促进[5, 6]。
此外，草甘膦和市售草甘膦除草剂制剂，在远低于农业使用的剂量，均会通过在24小时内激活细胞中的胱天蛋白酶3/7来严重影响胚胎和胎盘细胞、线粒体繁殖、线粒体的损伤和程序性细胞死亡。观察到的其他影响包括细胞毒性和遗传毒性、雄激素和雌激素受体的内分泌破坏，以及细胞系中的DNA损伤[7, 8]。
最近，用（含草甘膦残留的）抗草甘膦转基因玉米喂养的大鼠在两个排毒器官肾脏和肝脏，以及心脏和造血系统中表现出功能改变[9]。
Belle研究小组提供了另一条支持草甘膦不良反应的证据。他们认为草甘膦及其主要代谢产物AMPA通过干扰生理DNA修复机制来改变细胞周期检查点。分析了几种草甘膦除草剂，它们从海胆胚胎的第一次细胞分裂中诱导了细胞周期功能障碍[10, 11]。该效果的阈值浓度比在田间作物上喷洒的浓度低500到4000倍。八毫摩尔草甘膦会延迟海胆第一次细胞裂解的动力学，从而通过干扰CDK1 / cyclin B复合物的活化来改变进入S期的过程[6, 12]。已知细胞周期检查点的这种失败会导致基因组不稳定，并可能导致癌症。与这些发现一致的是，草甘膦或其代谢产物的遗传毒性研究表明，DNA中不可逆转的破坏可能会增加致癌的风险[13, 14]。
除了先前报道的基于草甘膦的制剂对两栖动物头部结构的致畸作用外[15]，几乎没有关于与GBH或草甘膦致畸作用相关的分子机制的信息。关于大量使用GBHs的地区的神经缺陷和颅面畸形的报道，使我们找到了一种胚胎学方法，以探索低剂量草甘膦在非洲爪蟾和鸡胚发生中的作用。
我们在这里表明，用1/5000稀释的草甘膦除草剂制剂（相当于430 μM草甘膦）亚致死剂量处理的非洲爪蟾和鸡胚或单独注射草甘膦的青蛙胚胎（每个胚胎注射8至12 μM）足以诱发可再现的畸形。经草甘膦除草剂处理或用草甘膦注射的青蛙胚胎表现出非常相似的表型，包括躯干头缩短的缩短、头颅变小、小眼、独眼畸形、在神经期的神经嵴区缩小以及蝌蚪期的颅面畸形。
这些缺陷表明与视黄酸（RA）信号通路有关。使用一种依赖RA的报告基因的报告基因检测显示，草甘膦除草剂处理可增加内源性RA活性。令人惊讶的是，我们证明RA[16, 17]的拮抗剂RO 41-5253 * Ro）拯救了由草甘膦除草剂产生的表型。我们建议，草甘膦除草剂的至少部分致畸作用是由胚胎中内源性RA活性增加介导的。如Lammer等人的流行病学研究所述，这与过度RA引起的非常著名的综合征一致。在人类[18]和脊椎动物胚胎[19-25]中......
总之，尽管并非完全相同，但草甘膦除草剂制剂处理和单独草甘膦注射后的胚胎表现出相同的表型。商业制剂中的佐剂存在则可以解释其中的差异。综上所述，这些结果表明，草甘膦除草剂和单独草甘膦均会在诱导和分离过程中损害神经元分化、菱形形成以及神经嵴的形态。
Paganelli, A.CarrascoetA.Eal., Glyphosate- based herbicides produce
teratogenic effects on vertebrates by impairing retionic acid signaling. Chemical Research in Toxicology, 2010. 23, 1586-1595.
Paganelli, A., CarrascoetA.Eet al., (2010)。草甘膦基除草剂通过损伤损害视黄酸信号
对脊椎动物造成畸形影响。毒理学化学研究，23, 1586-1595.
http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/tx1001749
证据09（2012年3月）：《生态应用》（Ecological Applications）发表美国匹兹堡大学生物科学教授，匹兹堡生态谐调实验室主任Rick A. Relyea《草甘膦除草剂对于脊椎动物新的作用：捕食者动物减少除草剂死亡率；除草剂诱发抗捕食者动物形态》确认：
农药的使用对于减少作物有害生物流行对作物生长和保护人类健康至关重要。但是，对非目标物种（包括当前正在关注的生物分类群）的潜在意外影响的关注较少。
近年来提出的一个问题是，在存在掠夺性线索的情况下，农药可能具有更强的杀伤力，这一现象迄今为止仅在实验室中观察到。
第二个问题是农药是否会导致非目标物种发生意想不到的性状变化，尤其是可能模仿对自然环境胁迫源的适应性反应的性状变化。
我使用室外的中观空间，创建了一个简单的湿地社区，其中包含叶子凋落物、藻类、浮游动物和三个品种蛙（木蛙（Rana sylvatica或Lithobates sylvaticus]，豹蛙[R. pipiens或L. pipiens]和美洲蟾蜍[Bufo americanus或Anaxyrus americanus]）。
我使这个社区接触到与环境相关的草甘膦除草剂农达（Roundup Original MAX的0、1、2或3 mg酸当量[ae] / L酸）的因子组合，并与三种捕食者-线索处理（无捕食者，成年蝾螈 [Notophthalmus viridescens]或幼虫蜻蜓[Anax junius]）。
没有捕食者线索，草甘膦除草剂农达的死亡率与过去的研究一致。结合风险最高的捕食者（即蜻蜓）的线索，草甘膦除草剂农达的致死性降低（与过去的实验室研究直接相反）。死亡率的降低很可能是由于除草剂在水柱中分层以及掠食者线索的惊吓使蝌蚪逃到除草剂浓度较低的底层水域所致。
更惊人的发现是草甘膦除草剂农达诱导了蝌蚪的形态变化。在木蛙和豹蛙蝌蚪中，草甘膦除草剂农达在与蜻蜓提示引起的适应性变化相同的方向和相同的幅度下诱发了相对较深的尾巴。据我所知，这是第一项表明农药可以诱导脊椎动物形态变化的研究。此外，数据表明该除草剂可能正在激活蝌蚪对抗捕食者反应的发育途径。
总的来说，这些发现表明，世界上使用最广泛的除草剂对非目标物种的影响可能比以前考虑的要深得多。
Rick A. Relyea.New effects of Roundup on amphibians: Predators reduce herbicide mortality; herbicides induce antipredator morphology.Ecological Applications, March 2012; 22 (2): 634
Rick A. Relyea。草甘膦除草剂对于脊椎动物新的作用：捕食者动物减少除草剂死亡率；除草剂诱发抗捕食者动物形态。生态应用，2012年3月; 22 (2): 634
http://www.esajournals.org/doi/abs/10.1890/11-0189.1
证据10（2016年9月）：《环境毒理学与药理学》（Environ Toxicol Pharmacol.）发表美国Sacred心脏大学生物学系Nicole M Royet al.《草甘膦可诱发Danio rerio（斑马鱼）的心血管毒性》确认：
草甘膦是广泛用于农业实践和家庭花园护理的广谱除草剂。尽管化学产业将其标记为“安全”，但该产业测试的剂量并未模拟长期暴露于环境中生物长时间暴露于亚致死剂量下的情况。鉴于草甘膦的广泛使用和接触，需要研究发育毒性。在这里，我们利用斑马鱼脊椎动物模型系统来研究草甘膦对心脏发育的早期影响。
从胚芽开始用50μg/ ml草甘膦浸泡胚胎的处理会导致心房和心室的结构异常、不规则心循环、部位倒置以及通过实时成像和免疫组织化学确定的48h心跳减少。使用fli-1转基因胚胎确定了体内血管也受到影响。为了确定受精后48h的效应是否是由于心肌前体的早期改变引起的，我们还研究了用Mef2抗体和通过mef2ca原位杂交进行的心肌细胞发育，并在早期心脏构图阶段发现了Mef2 / mef2ca染色模式的改变。
我们得出的结论是，草甘膦对斑马鱼的心脏具有发育毒性。
Nicole M Royet al., Glyphosate induces cardiovascular toxicity in Danio rerio,
Environ Toxicol Pharmacol. 2016 Sep;46:292-300
Nicole M Royet al.，草甘膦可诱发Danio rerio（斑马鱼）的心血管毒性。
环境毒理学与药理学。2016年9月；46:292-300
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/27525560/
证据11（2019年9月）：《应用毒理学杂志》（J of Applied Toxicology）发表Stellenbosch大学植物与动物学系O. Oluwaseun Babalolaet al.《使用青蛙胚胎致畸试验-非洲爪蟾对三种草甘膦制剂的死亡率、致畸性和生长抑制》确认：
世界各地有大量证据表明，暴露于草甘膦，毒性和非目标生物体的生理功能之间存在联系。尽管草甘膦制剂被广泛用于杂草和外来植物的管理，但其生态毒理学信息仍然很少。
使用96小时青蛙胚胎致畸试验-非洲爪蟾方案，评估了三种基于草甘膦的制剂的胚胎毒性和致畸性。
非洲爪蟾的胚胎分别以0.3-1.3、130-280和320-560 mg酸当量（a.e。）/ L的浓度暴露于草甘膦除草剂农达（Roundup），Kilo Max和Enviro草甘膦。
结果显示，草甘膦除草剂农达的96小时LC50为1.05 mg a.e / L，比其他配方更具毒性。相比之下，Kilo Max和Enviro草甘膦分别为207 mg a.e./L和466 mg a.e./L。
尽管草甘膦除草剂农达和Kilo Max制剂均显示出对幼虫幼虫生长的抑制作用（P <0.05），但三种制剂的最小浓度抑制生长率均高于0.30基线，表明该制剂中没有明显的生长抑制作用。
对于致畸性，草甘膦除草剂农达和草甘膦环境制剂表现出增加的致畸痕迹，致畸指数分别为1.7和1.6。Kilo Max配方显示低致畸性，致畸指数为1.4。这些配方引起的特征性畸形包括全身性水肿、心脏和腹部水肿、肠道形成不当和轴向畸形。这项研究证实，这些制剂可能是潜在的生理和生态健康破坏者，特别是在致畸性和生长破坏方面。表征其表面活性剂贡献的进一步研究有重大价值。
与草甘膦接触引起的不利健康影响的风险是野生生物和人类关注的问题（Paganelli等，2010）。例如，有人提出暗示，居住在大量喷洒草甘膦的区域附近的人类（尤其是怀孕的女性）可能会显示出先天畸形的增加（Heeren，Tyler和Mandeya，2003年）。
观察到与草甘膦除草剂农达制剂接触相关的特征性畸形包括不适当的肠卷曲（图2G）、水肿（严重的全身性，腹部和心脏；图2D-2F）、起泡以及头部（在EC50浓度附近时出现椭圆形和异常头状）。一些畸形同时发生在单个生物体中。按照以下顺序记录了暴露于草甘膦除草剂农达制剂的各种畸形类别发生率：肠道异常（42.5％）；全身水肿（22.6％）；起泡（22.2） ％），腹部水肿（5.4％），心脏水肿（3.6％），头部（2.3％）和眼睛（1.4％）。
在本研究中使用的三种草甘膦制剂中，只有草甘膦除草剂农达表现出毒性令人担忧，半致死量LC50为1.05 mg / L。 值得注意的是，当以推荐的水生施用量施用时，该LC低于预期的环境浓度1.43 mg a.e./L（Govidarajulu，2008）。 该结果表明，在预期的环境浓度为1.43 mg ae / L的情况下，与本研究中记录的96小时LC50为1.05 mg ae / L相比，在现场情况下可能发生> 80％的死亡率，尤其是直接应用时进入水体以控制水生植物。
本研究还证实，不能排除水生环境中的农药污染是全球两栖动物数量下降的潜在驱动因素之一。因此，不能低估早期（第一阶段）胚胎幼虫杀伤力评估的重要性，尤其是在筛选实际应用的制剂而不是目前进行的活性成分筛选时。
O. Oluwaseun Babalolaet al., Mortality, teratogenicity and growth inhibition of
three glyphosate formulations using Frog Embryo Teratogenesis Assay‐Xenopus,
J of Applied Toxicology, Sep 2019; 39(9) pp1257-1266
O. Oluwaseun Babalolaet al.，使用青蛙胚胎致畸试验-非洲爪蟾对三种草甘膦制剂的死亡率、致畸性和生长抑制。应用毒理学杂志 2019年9月；39(9) pp1257-1266
https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/jat.3811
4、丹麦养猪场饲料草甘膦残留与新生猪仔畸形密切相关
证据12（2014年5月）：《环境与分析毒理学杂志》（J of Env & Analytical Toxicology）发表莱比锡大学兽医学院细菌学和真菌学研究所、丹麦Hvidsten养猪场、埃及萨达特市大学兽医学院禽和兔疾病系Monika Krüger et al.《畸形仔猪中草甘膦的检测》确认：
去年春天，由于新生仔猪畸形比例很高，丹麦的一位养猪场主将38只出生时活体但畸形的一日大仔猪带到的我们的实验室。有关报道提出了有关此事件可能原因的假设。注意到如果母猪在怀孕的前40天饲料中含有0.87-1.13 ppm的草甘膦（N-膦酰基甲基甘氨酸），畸形率就会增加到每出生260只仔猪就有一只畸形。如果母猪饲料中的草甘膦含量减少到为0.25 ppm，则每出生1432头只仔猪就有一只畸形。这些仔猪表现出不同的异常，例如耳部萎缩、脊柱和颅骨变形、头和腿部萎缩中的颅骨孔。 在一只小猪中，一只眼睛没有发育，只有一只大眼睛。 还出现了不带象鼻舌的小猪和带睾丸的雌性小猪。 一只畸形的仔猪显示腹部肿胀，前肠和后肠未连接（图1）。
使用ELISA（酶联免疫吸附剂测定）检测了畸形安乐死的一天大的丹麦仔猪（N = 38）在不同器官和组织（如肺、肝、肾、脑、肠壁和心脏）中的草甘膦残留物。所有器官或组织中都检测到浓度不同的草甘膦。 最高浓度出现在肺（范围0.4-80 µg / ml）和心脏（范围0.15-80 µg / ml）中。在肌肉中检测到最低浓度（4.4-6.4 µg / g）。这些畸形仔猪中检测到这种草甘膦浓度可能是导致这些先天性异常的原因。迫切需要进一步的研究，以证明或排除草甘膦在仔猪和其他动物畸形中的作用。
Paganelli等[7]在注射浓度为8-12 µM草甘膦鸡胚中发现先天性畸形。分子表型与发育机制的破坏有关，涉及草甘膦的活性成分而不是佐剂诱导的神经顶峰、胚胎中线形成和头顶模式，这是由于类维生素A信号转导受损所致。作者概述了距喷洒除草剂几米的家庭儿童的畸形报告。 当他们的母亲在怀孕2至8周受到污染时，人类胚胎发生畸形的风险非常高。 这些仔猪的器官、肠壁和肉中检测到的草甘膦浓度怀疑与草甘膦有关。
Monika Krügeret al., Detection of Glyphosate in Malformed Piglets.
J of Env & Analytical Toxicology. 2014, 4:5
Monika Krügeret al.，畸形仔猪中草甘膦的检测。环境与分析毒理学。2014，4:5
证据13（2014年2月）：丹麦Aarhus大学动物科学系丹麦食物与农业中心（DCA）发表《关于“给牲畜饲喂抗草甘膦转基因大豆产品”的备忘录》确认：
概述
背景
丹麦食物与农业中心（DCA）受委托编写备忘录，以使丹麦食品、农业和渔业部能够评估对转基因作物（包括草甘膦处理过的作物）的潜在不利影响进行进一步测试或研究的需求。除其他外，这一要求来自公众对此问题的辩论以及实践中的一些观察结果。
丹麦兽医和食品管理局特别要求该备忘录包括：
1、关于转基因饲料与非转基因饲料的家畜生长和健康的已发表研究的摘要，包括这样的研究是否包括有关作物喷洒农药或饲料中农药残留的信息。
2、关于转基因饲料作物与非转基因饲料作物或饲料中农药残留的已发表研究的摘要。
3、评估是否需要使用转基因饲料进行饲养实验。与非转基因饲料相比，主要是豆粕，如果有必要，如何进行。
4、评估探索转基因饲料（主要是豆粕）是否与相应的非转基因饲料相比在农药残留或其他可能影响动物健康的含量或质量参数方面有所不同的评估。
5、丹麦农民的观察意见分析（附录1）。
根据此要求，DCA审查了这些领域的文献，以确定对动物健康的潜在风险。
结论
根据所审查的材料，DCA估计触发因素是草甘膦而不是转基因作物本身，并且已经建立了两个假设，这些假设需要实验证据被拒绝或接受：
A、草甘膦会影响动物肠道中的微生物种群（微生物群），对动物生产和健康产生次生影响
B、草甘膦会影响动物的矿物质状况，对动物的生产和健康产生次生影响
这些假设基于草甘膦的已知作用，即对细菌（在牲畜的肠道中数量很多）的作用和对矿物质（包括牲畜中必需的微量矿物质）的螯合作用。该假设得到有关农场动物的最新文献的支持，即，实验室研究中，草甘膦对致病原菌的抑制作用小于非致病原菌，而且在血液中微量矿物质含量低的丹麦奶牛的尿液中发现草甘膦。
基于多年来全球范围内草甘膦的使用不断增加，基于转基因大豆中草甘膦的含量，基于丹麦奶牛尿液中草甘膦的发现以及基于草甘膦对致病原性和非致病原性细菌的不同抑制作用，估计有必要检验两个陈述的假设。同样，有必要核实进口用于动物饲料的转基因大豆产品中有多少草甘膦。
研究应包括有关细菌菌株的体外实验室实验和对动物的体内实验。必须仔细设计最佳和详细的协议，但可能包括已知草甘膦浓度的豆粕和谷物。
丹麦兽医和食品管理局的以下声明支持了该备忘录的委托：“经过彻底的风险评估，欧盟已经批准了许多转基因植物用于食品和饲料用途，可以用于以与非转基因植物产品相似的方式。来自转基因植物的产品主要以蛋白质来源的形式存在，例如来自耐除草剂的大豆的豆粕，被广泛用于饲养猪，牛和家禽等农场动物。在这一领域的公开辩论中，通常会讨论这种产品是否比传统的非转基因作物的同类产品更不适合用作动物饲料，一些丹麦农民观察到从转基因大豆粉转为非转基因大豆粉后，动物生产有所改善。
有推测称，草甘膦除草剂农达中活性成分或载体残留物可能对动物产生潜在的不利影响，尤其是针对草甘膦除草剂农达具有抗性作物。需要一项备忘录，以评估该地区的现有知识，以便为丹麦粮食、农业和渔业部评估该地区进一步测试或研究的需要提供坚实的基础。”
丹麦兽医和食品管理局要求在备忘录中包括以下项目：
1、关于转基因饲料与非转基因饲料的家畜生长和健康的已发表研究的摘要，包括这些研究是否包括有关喷洒作物或饲料中农药残留的信息。
2、关于转基因饲料作物与非转基因饲料作物或饲料中农药残留的已发表研究的摘要。
3、评估是否需要使用转基因动物进行豆粕为主与非转基因饲料相比的饲养实验，以及，如必要的话，这样的试验应如何做。
4、评估是否有必要探索可能影响动物健康的转基因饲料（主要是豆粕）与相应的非转基因饲料是否与相应的非转基因饲料不同，包括农药残留或其他物质的含量或质量参数。
5、丹麦农民的观察意见分析（附录1）。
引言
与牲畜饲料最相关的转基因植物
在转基因植物中，耐除草剂的转基因植物是最普遍的，而在这些草甘膦耐受性的转基因植物中是最常见的。草甘膦是草甘膦除草剂农达（Roundup）和类似产品中的活性成分。还可以对植物进行基因改造以提高其抗虫性和其他性状或性状的组合。来自孟山都的耐草甘膦转基因植物被称为“抗农达”（Roundup Ready）。 耐草甘膦的大豆是最普遍的转基因作物。
耐草甘膦的转基因大豆植物需要特别注意，因为基于这种植物的动物饲料大量进口到丹麦。
(http://www.foedevarestyrelsen.dk/Publikationer/Alle%20publikationer/2012106.pdf).
草甘膦功能– EPSPS酶
草甘膦通过沿着所谓的莽草酸酯途径与酶（5-烯醇丙酮酸shi酸酯-3-磷酸合酶，EPSPS）结合而起作用，该酶参与植物中芳香族氨基酸（苯丙氨酸，酪氨酸和色氨酸）的形成（Funke et al., 2006）。草甘膦的结合会阻断酶，抑制芳香族氨基酸的形成，植物因缺乏这些氨基酸而死亡。
草甘膦影响的生物
不仅在植物中，而且在许多微生物（真菌和细菌）和寄生虫中，都发现了莽草酸酯途径-进而是EPSPS酶。2003年，孟山都公司申请了将草甘膦用作抗寄生虫药的专利（例如，针对疟疾寄生虫）。该专利特别指出细菌和其他微生物对草甘膦敏感（https://www.google.com/patents/US7771736）。因此，已经很长一段时间以来就知道草甘膦会影响微生物，这意味着例如动物和人的肠道中的细菌会受到通过饮食进入系统的草甘膦的影响。尽管如此，草甘膦的风险评估中并未包括草甘膦对农场养殖动物和人类肠道中微生物的影响。
草甘膦敏感性的例外
EPSPS酶对草甘膦的敏感性存在例外。在许多生物中，有一些酶的变体未被草甘膦完全抑制，因此芳香族氨基酸的形成没有被完全阻断。诸如沙门氏菌和大肠杆菌等潜在致病细菌是可能带有不太敏感的EPSPS变体的某些微生物（参见专利EP 2327785 A2，https://www.google.com/patents/EP2327785A2?cl=zh_CN）。
耐草甘膦转基因植物的创建
耐草甘膦的转基因植物的生产正是利用了草甘膦功能的这种例外。农杆菌属细菌菌株CP4含有编码该酶变体的基因，其中草甘膦的结合不阻断该酶的功能。将该基因插入植物可产生耐草甘膦的转基因植物。因此，在用草甘膦喷洒后，这些转基因植物不会因缺少这些氨基酸而死亡。
动物和人类对EPSPS酶和草甘膦的接触
动物和人类不携带EPSPS酶，因此必须从饮食中获取这些必需氨基酸。但是，缺少EPSPS酶并不意味着草甘膦不能通过EPSPS酶途径影响人类和动物，因为动物和人类以多种方式受到肠道细菌的影响，而肠道细菌又可能是受到饮食中草甘膦的影响（Samsel＆Seneff 2013）。
动物和人类对EPSPS酶和草甘膦的接触
动物和人类不携带EPSPS酶，因此必须从饮食中获取这些必需氨基酸。 但是，缺少EPSPS酶并不意味着草甘膦不能通过EPSPS酶途径影响人类和动物，因为动物和人类以多种方式受到肠道细菌的影响，而肠道细菌可能以多种方式受到饮食中草甘膦的影响（Samsel＆Seneff 2013）。
草甘膦与金属的结合
草甘膦具有螯合性质，这意味着它与金属结合。草甘膦不仅与单一金属结合，而且与多种金属结合。 这些金属中的几种（例如锰和锌）是牲畜和其他动物中酶活性所必需的辅助因子。
另一个例子是金属钴，它在动物体内对于维生素B12的生产至关重要。与草甘膦结合的金属变得不活泼，因此无法发挥作用，无法在这些生物系统中用作构建基块。
农场养殖动物和人类的失活既可能发生在肠道的吸收前，有降低矿物质吸收的相关风险，也发生了吸收后草甘膦可以结合血液和组织中矿物质的吸收后风险。如果某些必需的矿物质被草甘膦束缚，则存在牲畜可能发生缺乏某些矿物质的风险，例如缺乏锌。对于处于特别敏感阶段（断奶、怀孕初期、出生等）的动物来说，这可能是一个特殊的问题，在这些阶段中某些矿物质对于某些重要的身体机能至关重要。
公开发表的文献中没有关于家畜中是否存在草甘膦的数量会影响矿物质有效性的数据。但是，必须注意，血液和组织中草甘膦的浓度尤为重要，因为在那儿需要矿物质来形成酶等。血浆和组织中游离金属离子的含量即使少量降低也可能很关键。例如，少量的锌缺乏会导致动物的先天缺陷和死亡，也可能引发腹泻。草甘膦的风险评估中未包括对通过牲畜饲料中残留含量吸收的草甘膦矿物质状况的潜在影响。
草甘膦的一般特性和对动物的次生效应的结论
高等动物没有EPSPS酶，因此不受EPSPS酶抑制作用的直接影响。但是，草甘膦通过影响肠道菌群，包括影响不同细菌种群之间的平衡（也包括让不同程度上利用EPSPS酶对草甘膦不敏感的变体的致病菌通过），而影响高等动物。
草甘膦与金属结合的能力可能会导致重要生物途径中的矿物质短缺。
草甘膦的风险评估
如前所述，过去对草甘膦进行的风险评估没有包括对牲畜肠道中微生物或其矿物质状态的影响。我们的评估是，当前草甘膦风险评估中包括的一般代谢和喂养实验不会揭示饲料中草甘膦残留物的特定作用，也不会揭示家畜肠道中的微生物对动物体内循环矿物质结合的影响，也不会揭示对健康产生任何次生影响。
该意见基于以下事实：评估中未包括针对牲畜矿物质状况和肠道微生物种群的特定参数，并且所用动物对这些参数的影响不够敏感。至关重要的是，所使用的测试动物必须处于相关的生理和生产阶段，并对被测物敏感-在这方面，对矿物质状态和肠道微生物群的影响敏感。例如，对于猪肠道微生物群来说，敏感的生理阶段可能是在断奶后从牛奶向固体饲料过渡的过程中，对于奶牛来说，在产犊后牛奶产量如此之高以至于营养不仅来自于肠道饮食也来自她的身体储备。关于矿物质状态的敏感生理阶段可能是，例如，怀孕初期，胎儿和断奶后广泛的细胞分裂和细胞分化。农场养殖动物经历了这样的敏感时期，但风险评估未解决这些条件。
假设
上述条件导致以下假设：
-- 草甘膦会影响农场动物的肠道菌群，并对动物次生影响生产与健康
-- 草甘膦会影响家畜的矿物质状况，从而对动物次生影响生产与健康大豆饲料
转基因产品的随机测试
在欧盟，对草甘膦规定的最大残留量为每公斤大豆/豆粕20毫克；为了进行比较，大麦和燕麦的最大残留量也是每公斤20毫克，而小麦则为每公斤10毫克。...
项目1.牲畜的生长与健康
许多科学评论总结了关于非转基因饲料与非转基因饲料的牲畜生长和健康状况的现有知识，最新知识可追溯至2012年（Flachowsky et al., 2012）。...
结论，项目1
用转基因饲料和非转基因饲料喂养的动物的实验文献中通常没有关于农作物喷洒或农药残留的信息。...
项目2：转基因饲料与非转基因饲料相比农药残留...
尚无耐草甘膦转基因作物中草甘膦除草剂农达水平的记录，但估计阿根廷每公顷大豆的生产量为8升（DanWatch, 2011）。...
结论，项目2
喷洒作物的动物饲料中可能会残留农药，包括草甘膦。转基因饲料与非转基因饲料作物和动物饲料中的草甘膦残留数据很少，以转基因饲料为牲畜的实验中发表的结果中通常不包括有关草甘膦残留方面的信息。
项目4、需要研究转基因饲料与非转基因饲料中的农药残留和质量参数
关于抗除草剂转基因植物的饲料中农药残留的可用信息很少。迫切需要提供此信息，尤其是耐草甘膦转基因大豆的广泛使用所引起的饲料中的草甘膦信息，并且需要有关收获前喷雾的谷物中草甘膦残留物的更多信息。
草甘膦处理过的作物在何种程度上具有较低的矿物质含量并因此导致牲畜的矿物质供应下降尚不确定。
在最近的评论中，Duke等人（Duke et al., 2012）发现，在21项研究中，有11项报告称草甘膦对植物的矿物质状态没有影响，而其余10项研究则相反。草甘膦对草料矿物质含量的潜在影响未包括在草甘膦的风险评估中。在此基础上，考虑到矿物质对于牲畜重要功能的重要性，有必要掌握有关草甘膦喷洒的作物中微量矿物质（如锰，钴和锌）含量的知识。...
附录A：...
农民2：养猪者
养猪生产者的观察，记录和分析均来自喂养常规母猪群的原料，约450只猪在2011年4月更换为不含GMO的大豆-但后来为断奶的猪准备了更多的库存。农夫阅读了有关该主题的专业文献，关于青蛙和鸡胎儿的伤害的文章（见下文）说服了他认为草甘膦引起了他在新生猪中观察到的畸形。...
新生猪出现许多畸形
- 畸形率：草甘膦的饲料含量高于1 mg / kg时，其含量是0.12 mg / kg时的两倍（Thomas Bøhn进行的统计分析）
·在畸形猪的许多组织中（包括其他组织）测量到草甘膦（ng / g）：肺，肝，肾，心脏等。...
关于生殖状态的观察，即流产、畸形和每窝产仔数表明，前面解释的矿物质结合可能与饲料中草甘膦的浓度有关。...
Martin Tang Sørensenet al., Memorandum on "The feeding of genetically modified glyphosate resistant soyproducts to livestock", Danish Centre for Food and Agriculture(DCA), Dept of Animal Science, Aarhus University, Denmark, 4 February 2014
Martin Tang Sørensenet al.，关于“给牲畜饲喂抗草甘膦转基因大豆产品”的备忘录，丹麦食物与农业中心（DCA），丹麦Aarhus大学动物科学系，2014年2月4日
证据14（2017年4月）：丹麦养猪场主Borup Pedersen2017年4月向海牙起诉孟山都草甘膦除草剂特别法庭提交的证词《猪场研究--显示与转基因大豆与草甘膦除草剂关联的健康问题、畸形、流产与不育问题》确认：
2011年，我开始怀疑猪饲料中的转基因大豆是造成我的猪群一系列健康问题的原因。我注意到每批转基因大豆造成猪群中不同的健康问题，特别是拉稀与母猪繁殖猪仔的能力。
开始读了将转基因大豆与不育、畸形、弱劣后代与内部器官损伤关联的一些科学论文后，我对转基因大豆更加担忧。所以我开始想转基因大豆也是造成我在猪群中见到的健康问题的根源。
变换为非转基因大豆成分后的健康影响
我的第一项措施当然就是是将猪饲料中添加的转基因大豆变换为非转基因大豆（即天然大豆），结果见到显著的差异。猪群中的拉稀问题消失了，猪群用药量下降为喂养转基因大豆成分饲料时用药量的三分之一。同时，母猪群的其他疾病问题，如母猪胃溃疡和胀肚，也消失了。喂养转进因大豆成分饲料时，这些疾病成为母猪死亡的主要病因。2009-2011年两年期间，450头母猪的养猪场记录了36头母猪由于胃疾病问题死亡：平均每个月至少一头母猪由于胃溃疡或者胀肚问题死亡。喂养转基因大豆成分饲料时，一年中还有两头母猪由于缺乏食欲死亡。
变换为非转基因大豆成分饲料后，母猪更加平静，生产更多猪奶。每只猪，平均喂奶养育的猪仔数量比喂养转基因大豆成分饲料时多两只猪仔，因此减少了“哺乳母猪”需要的数量。喂养非转基因大豆成分饲料或转基因大豆成分中草甘膦残留水平较低时，我们还能观察记录到母猪生育的一窝猪仔的数量也增加了。我们注意到，喂养转基因大豆成分饲料时生育一窝猪只能有10只至11只猪仔的老母猪，变换为非转基因大豆成分饲料后，这些老母猪突然生育哺乳一窝猪达到14只。这是好的变化，但是对于年纪较大的老母猪而言有些意外。在哺乳母猪栏中，变换为非转基因大豆成分饲料后，母猪健康改善也很明显：粪便变得比较干燥而不是拉稀、不再需要服用治拉稀的药物。（目前凡喂养转基因大豆成分养殖场，普遍用药量较大）。养猪场的效率与经济效益得到改善。
喂养转基因大豆成分饲料时许多猪遭受相同严重类型拉稀猪，最严重时，多达30%猪仔出生后一周死亡。同时，整个新生猪仔区健康问题很多：许多窝猪仔遭受拉稀、大部分母猪奶不足，难于找到健康母猪做养母。年轻母猪及其生育的猪仔影响最大。
畸形猪仔
2011年的研究表明草甘膦残留造成我在猪群中见到的相同类型畸形，我原先预计变换为非转基因大豆成分饲料后畸形猪仔问题也应当消失，但并非如此，猪群中继续出生畸形猪仔。
我们开始检测饲料中草甘膦残留水平、并且记录、拍照、拍摄视频、冷冻出生的畸形猪仔。两年期间总共生产了32,000只猪后，我们可以结论：饲料中草甘膦残留水平最低0.1克/吨（=0.1ppm）到0.2ppm -- 1.1ppm 与2.2ppm与养猪场同期出生的颅骨、脊柱和腿畸形三类畸形猪仔比例1/1871 -- 1/1195 -- 1/529 -- 1/246成线性对应关系。
还有相当数量猪仔具有更多类型畸形缺陷，如耳朵、舌头畸形、没有肛门、肾缺陷、敞开胃（没有肌肉、皮肤护盖）、局部没有皮肤、缺眼或大眼、肌肉运动障碍、生殖器官错位、性别异常或双性、木乃伊死胎猪、尾巴异常或者脊椎扭结等。
德国莱比锡大学莫妮卡-克鲁格教授（Prof. Monika Krüger）进行了这些草甘膦残留检测，对畸形猪仔引起兴趣。所以我将38个冷冻的畸形猪仔带到莱比锡大学进行分析。下边链接的报告总结了对它们进行分析的结果。
【请参看证据11：（2014年4月）：《环境与分析毒理学杂志》（J Environ Anal Toxicol）发表德国莱比锡大学兽医学院细菌学、真菌学系、丹麦Hvidsten养猪场、埃及萨达特市大学兽医学院禽流感和兔子疾病系 Monika Krüger et al. 《在畸形猪仔中检测到草甘膦》】
了解了每天饲料中草甘膦残留的水平，我在养猪场计算机上分析了有关的数据，得以回顾给定期间的自然流产，令人恐惧发现猪饲料中草甘膦残留水平从0.2ppm到1.1ppm与2.2ppm综合在一起，我看到自然流产率增加了500%！
猪饲料、猪粪、尿与养猪场工作人员尿中草甘膦残留
本研究过程中，我们多次采集了猪饲料、猪粪便与尿样检测草甘膦残留水平。检测中我们发现，猪粪便草甘膦残留水平为猪饲料草甘膦水平的五分之一，猪尿样中草甘膦残留水平为猪饲料草甘膦水平的1%至4%，与德国莱比锡大学检测的畸形猪仔体内草甘膦残留水平类似。
我们也采集我我自己以及养猪场其他职工的尿样。
我的尿样检测到草甘膦残留含量2.58ppb，其他职工尿样草甘膦残留含量0.74ppb，表明，如果我的代谢水平与养猪场的猪相同，我食用的食物中草甘膦残留水平为0.2ppm，或者0.2克/吨食物。这使我处于养猪场中生育畸形猪仔、生育问题以及致癌高风险草甘膦残留水平，让我极为担心，因为我食用从当地商店购买的通常食物。
我也采集了当地奶牛场牛奶。这个奶牛场的农民患了癌症，希望了解自己奶牛场牛奶草甘膦残留水平。令人痛心的时，奶牛场农民49岁已经去世。他的癌症始于肾，农田与我们养猪场邻居的另外两位农民因前列腺癌也已经去世。
总结我的发现，毫无疑问，对农作物喷洒草甘膦除草剂是造成养猪场猪生育问题、自然流产与畸形猪仔的直接原因，而且，作为一位农民，我知道自然如何运作，知道民众已经受到影响。草甘膦残留无处不在。
农民的职责是向人民提供健康的、富营养的与足够的食物。转基因或者草甘膦不提供任何这些。
Borup Pedersen, A farm study - showing Health issues, Deformities, Abortions and Fertility problems in pigs linked to GM soya and Roundup- Testimony presented to the Special Court for Prosecuting Monsanto's Glyphosate Herbicide, Hague, April 2017
猪场研究--显示与转基因大豆与草甘膦除草剂关联的健康问题、畸形、流产与不育问题
-- 2017年4月向海牙起诉孟山都草甘膦除草剂特别法庭提交的证词
http://www.monsanto-tribunal.org/upload/asset_cache/223719479.pdf
5、美国、阿根廷、巴拉圭学者流行病学调查确认高浓度草甘膦环境暴露与先天性异常发生率剧增相关
证据15（2002年6月）：《环境健康观点》（Env. Health Perspectives）发表美国明尼苏达大学环境医学与病理学实验室Vincent F Garryet al.《美国明尼苏达州红河谷地区农药施用者的出生缺陷、受孕季节和性别》确认：
我们先前证明，在美国明尼苏达州红河谷（RRV）居民的孩子中，出生缺陷的频率在1989-1991年期间显着高于该州的其他主要农业地区，其中男性农药施用者的孩子风险最高。1997年至1998年对695个家庭和1,532个孩子进行的目前这个较小型横断面研究对由父母报告的出生缺陷确定的农场家庭生殖健康结局进行了更详细的检查。
在本研究中，在出生的第一年，出生缺陷率是每1000名31.3例出生，其中83％报告的出生缺陷由医学记录证实。后来，在出生后的头3年内将那些被确认患有出生或发育障碍的儿童包括在内，导致出生缺陷率为每千人47.0名儿童（来自1,532例活产的72名儿童）。春季受孕比其他任何季节受孕出生的儿童有显着更高先天缺陷率（7.6 vs. 3.7％）。十二个家庭有一个以上有先天缺陷的孩子（n = 28个孩子）。来自重复性先天缺陷家庭的儿童中有42％为春季受孕的孩子，这一比例大大高于其他任何季节。
被定义有一级堂表亲亲属关系的三个家庭的孩子具有相同或相似先天缺陷，这与孟德尔的继承模式一致。其余的9个家庭没有遵循孟德尔的继承模式。施药者家庭出生的具有先天缺陷的儿童的性别比显示，在特定农药类别使用和接触类别中，暴露于杀虫剂者的有缺陷孩子中男性占主导地位（1.75比1）。在杀菌剂暴露类别中，正常女孩的出生数量大大超过男性（1.25至1）。同样，患有先天缺陷孩子中的男女比例也明显较低（0.57比1；p = 0.02）。
熏蒸剂磷化氢施用者所生的孩子中神经和神经行为发育不良的影响更为集中（几率[OR] = 2.48；置信区间[CI]，1.2-5.1）。使用除草剂草甘膦在神经行为类别上的OR为3.6（CI，1.3-9.6）。
最后，这些研究指出：（a）在春季使用除草剂可能是观察到的先天缺陷的一个因素，（b）杀真菌剂可能是确定明尼苏达州红河谷（RRV）家庭子女性别的重要因素。因此，两类显著不同的农药似乎对不同的生殖结果有不利影响。需要基于生物学的验证性研究。
这些更详细的努力记录的结果表明，父亲使用磷化氢（phosphine）的14名儿童中有4名患有涉及中枢神经系统的先天缺陷。父母报告ADD / ADHD（注意力缺陷障碍/注意缺陷多动障碍）的2名自闭症（autism）儿童中有2名，而14名中的5名父亲使用了磷化氢。奇怪的是，在中枢神经系统出生缺陷的4名儿童中，有2名患有右眼的单侧先天性白内障，而没有其他伴随的出生缺陷。这些孩子出乎意料地都是女性。父母使用磷化氢的儿童中，有3.8％的儿童使用膦，而父母不使用熏蒸剂的儿童中有1.5％的儿童患有中枢神经系统不良或神经行为后遗症（OR = 2.5； CI，1.22-5.05）。
同样，在不利的出生和发育影响组中，父母使用磷酸正氨基除草剂（草甘膦，Roundup）的比例非常高。有父母报告的ADD / ADHD（注意力缺陷综合症/注意力缺陷多动症）的儿童中有43％（14个中的6个）使用了膦酰氨基除草剂（OR = 3.6；CI为1.35-9.65）。与主要器官和/或功能系统相比，没有其他常用的杀虫剂与特定的不良出生缺陷或发育影响有独特的关联。与除草剂的使用相比，在农用农药的4-6个月内使用不同种类的农药，而没有其他种类的农药（除草剂的使用期为4月15日至7月1日）表明，所用农药之间的相互作用可能是观察到出生缺陷的一个因素（表6）。
关于除草剂草甘膦，我们目前的研究表明，ADD / ADHD（注意力缺陷综合症/注意力缺陷多动症）与该除草剂的使用之间存在暂时的联系。...最后，在按类别分类的14种农药中（表5），只有膦和草甘膦显示出与非常高的不良出生和神经发育作用显着相关。这些观察是否是偶然关联仍然值得关注。 需要进一步详细的神经发育研究来解决这些问题。
Vincent F Garryet al., Birth defects, season of conception, and sex of children born to pesticide applicators living in the Red River Valley of Minnesota, USA.
Env. Health Perspectives. 1 June 2002;
Vincent F Garryet al.，美国明尼苏达州红河谷地区农药施用者的出生缺陷、
受孕季节和性别。环境健康观点。2002年6月.
https://ehp.niehs.nih.gov/doi/10.1289/ehp.02110s3441
证据16（2004年4月）：《流行病学》（Epidemiology）发表美国加州大学洛杉矶分校Rull, Rudolph P.《神经管缺陷与孕妇居住区靠近农用农药的应用》确认：
我们评估了1987年至1991年在加利福尼亚州出生的两个出生队列中确定的59种农业农药对母亲的环境暴露对神经管缺陷（NTD）的影响。
评估了受孕月附近发生的农药施用距离1,000米以内的母亲居住区，使用基于链接的加利福尼亚农药使用报告（PUR）和土地使用调查图的地理模型来提高PUR的空间分辨率。为了调整多次比较和相关的农药暴露，我们采用了分层逻辑回归，评估了具有相似理化特性的亚组中的药物，并将估计值与从常规逻辑模型获得的估计值进行了比较。
此外，我们估计了两种主要的神经管缺陷（NTD）亚型无脑症和脊柱裂的单独暴露效果，并针对这些结果采用了多级分层模型。与传统的逻辑模型相比，基于层次模型的效果估计的精度大大提高，因为效果估计已缩小为子组的平均值。
单个农药的暴露率很低（例如，灭多威的暴露率最高，在731例病例中为8.6％，在940例对照中为5.6％），因此限制了我们检测特定农药影响的能力。...草甘膦（OR：1.50; 95％CI：1.00，2.40）（表2）。
在多层次模型中检查NTD亚型，我们还观察到以下有机磷化合物的关联：毒死蜱（OR：1.54; 95％CI：0.87，2.73）与脊柱裂和草甘膦（OR：1.55; 95％CI：0.85， 2.85）与无脑症（OR：1.95; 95％CI：0.89，4.28）。
Rull, Rudolph P.et al., Neural tube defects and maternal residential proximity
to agricultural pesticide applications. Epidemiology. July 2004; 15(4)
Rull, Rudolph P.et al.，神经管缺陷与孕妇居住区靠近农用农药的应用。
流行病学，2004年7月；15(4)
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16495467/
证据17（2007年2月）：《儿科学》（Pediatr.）发表巴拉圭国立Asunción大学（UNA）医学系母婴中心小儿科、巴拉圭Encarnación地区医院Benítez-Leite Set al.《先天性畸形与有毒农药相关》确认：
目的：研究在巴拉圭Itapua省Encarnacion地区医院出生的新生儿接触农药与先天性畸形之间的关系。
材料和方法：2006年3月至2007年2月进行了一项前瞻性病例对照研究。病例包括所有先天性畸形的新生儿，所有对照都是在此后立即出生的同性健康儿童。医院外的分娩没有计算在内。，“接触”被认为是其他已知的先天性缺陷风险因素除外的与农用化学品的任何接触。
结果：共分析52例和87例对照。每个月的平均出生数为216。与危险因素显着相关的因素是：居住在经过处理的田地附近（OR 2.46，CI 95％1.09-5.57，p <0.02），居住位置小于1公里（OR 2.66，CI 95） ％； 1.19-5.97，p <0.008），在家中储存农药（OR 15.35，CI 95％，1.96-701.63），p <0.03），直接或意外接触农药（OR 3.19，CI 95％，0.97） -11.4，p <0.04），以及畸形家族史（OR 6.81，CI 5％，1.94-30.56，p <0.001）。其他已知的畸形危险因素没有显示统计学意义。
结论：结果表明接触农药与先天性畸形之间存在关联。需要进一步研究以证实这些发现。
Benítez-Leite Set al., Congenital Malformations Associated with Toxic Agricultural Chemicals. Pediatr. (Asunción), Feb 2007; 34(2)
Benítez-Leite Set al.，先天性畸形与有毒农药相关。儿科学。2007年2月；34(2)
http://scielo.iics.una.py/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1683-98032007000200002&lng=en&nrm=iso
证据18（2009年6月）《拉丁美洲生物多样性》报道《巴拉圭：放宽法律有利于大豆》确认：
“巴拉圭每年使用的农药超过2400万升，继续造成儿童死亡、新生儿畸形和环境恶化。尽管如此，巴拉圭国会议员于（2009年）5月22日批准了一项法律，允许使用对人类健康有剧毒的化学物质。“
国会授权随意使用农药。
巴拉圭每年使用的农药超过2400万升，继续造成儿童死亡，新生儿畸形和环境恶化。
尽管如此，5月22日，巴拉圭国会议员批准了《农业用植物检疫产品控制法》，该法为促进使用对人类健康高毒性化学物质开了绿灯。
议会的决定无视费尔南多·卢戈总统于4月底签署的1937/09号法令，该法令规定了在农业生产中适当使用农药的卫生措施，同时考虑到对健康、食品和环境的保护。该法令为保护水道规定了至少100 m的森林保护带，并在将要施用杀虫剂且邻近集聚和人口迁移地区的地方设置了障碍。...
农民和土著运动、公共机构和非政府组织认为，参议院通过的法律显示出立法者完全不负责任，他们不考虑到该法律使成千上万的农民和土著社区没有法律保护，每天一天遭受农药滥用和环境污染的后果。
民间社会组织说，在创造生产条件的借口下，通过促进大豆的机械化种植，可以自由造成人口中毒、破坏农作物、森林、土壤和水的污染。他们还指出，议会法违反了国家宪法的基本原则，例如生命、健康和在健康环境中生活的权利。。。。
在农民和土著人民等待总统否决议会批准的法律的同时，大豆种植者希望卢戈废除其1937/09号法令。如果他们没有实现自己的目标，大豆种植者将在本月底以“推动”的方式威胁全国大罢工。
卢戈总统申明他愿意在法律法规范围内与农业企业家对话，但警告说，他将执行有关在农业机械化生产中负责任使用农药的立法。 总统在为他的法令辩护时说：“该法令起源于卫生部和环境部（SEAM），除了遵守法律外，别无他法，并防止因滥用草甘膦或农达除草剂而造成的任何污染。
大豆种植扩大
巴拉圭的大型大豆主要来自巴西。 1960年代，由于肥沃的边境土地的低价以及阿尔弗雷多·斯特罗斯纳（Alfredo Stroessner）（1954-89）专政所提供的便利，他们开始定居。随着1980年代初期巴拉圭的“绿色革命”的开始（一种基于农用化学品的机械化和使用的农业实践），数百万公顷的原始森林消失了。
因此，企业家农业的扩张导致大豆单一栽培在1999年至2004年间增加到将近100万公顷，在2007/2008年农业期间达到280万公顷，占该国总面积的5％以上。东部地区的八个部门占农业面积的61％。
巴拉圭是南美大豆种植农业面积主要国家，是世界第四大油籽出口国和第六大生产国。
对于汤加斯帕劳（TomásPalau）社会调查组织（BASEIS）的社会学家和负责人而言，巴拉圭实际上受到了大豆的入侵，其社会和健康后果是空前的。
帕劳说：“从空中喷洒除草剂正在使大豆田周围的社区中毒，迫使农民离开他们的土地，然后由农业企业家以荒谬的价格将其购买。”
生命威胁
Itapúa，AltoParaná，Canindeyú和Caaguazú等高产转基因大豆的部门受到农药污染导致的畸形和死亡病例的影响最大。
巴拉圭非政府组织协会称，瓜拉尼土地上每年使用的农药超过2400万升，自2003年以来，巴拉圭进入了联合国农业组织的“关注国家”名单和食品（世界粮农组织）。
巴拉圭儿科协会于2006年3月至2007年2月在Itapúa部门进行的一项研究表明，母亲直接或间接接触农药的儿童中约有40％出生时患有某种畸形。研究警告说，如果孕妇居住在大豆作物的一公里范围内，则患有先天性畸形的孩子出生的风险会增加一倍。
对于来自农民组织国家协调委员会（MCNOC）的路易斯·阿瓜约（Luis Aguayo）强调，《农业用植物检疫产品控制法》的批准是种族灭绝的许可证，因为它将免费提供给人们使用毒性化学农药，从而危害人民，主要是生命，使人口中毒。
阿瓜约（Aguayo）说：“我们将捍卫我们家庭成员的生命，将毫不犹豫地捍卫我们的社区和环境。”他宣布他们将采取有力措施，以便卢戈否决权表示法律。
Paraguay: permisiva ley a favor de sojeros, Biodiversidad en America Latina. 24 junio 2009
巴拉圭：放宽法律有利于大豆，拉丁美洲生物多样性，2009年6月24日
http://www.biodiversidadla.org/content/view/full/50128
证据19（2010年8月）：阿根廷国立 Cordoba大学医学系发布《全国农作物喷洒城镇医师第一次会议报告》确认：
会议协调员：阿根廷国立 Cordoba大学医学系Medardo Ávila Vazquez医生、Carlos Nota教授。
近十年来，阿根廷农村地区和城郊地区的居民一直在向农业当局、法院、以及在公众面前进行抗议，因为他们认为阿根廷当前的农业工业化生产模式开展农业活动，对自己社区的健康遭到环境性影响，它们主要是通过喷洒用于不同类型农作物的农用化学品，还包括在人口稠密地区处理和储存这些化学品、废物处置以及在城镇中收集浸泡有化学药品的谷物。
2008年9月13日，来自Caroya，JesúsMaría，Sinacate，Alta Gracia，Cañadade Luque，MarcosJuárez，La Granja，Anisacate，RíoCeballos和LasPeñas等地区自组织邻居和环境保护非政府组织在科尔多瓦省首都科尔多巴（Córdoba）联合发布“卡洛亚（Caroya）宣言” [1]提出了他们的投诉，报告了他们的反映。
“卡洛亚宣言”文件强调：
大豆化、单一栽培、直接播种、集约化耕种……以下列顺序影响了我们的自然共存：健康：在这些农作物喷洒的城镇，居民营养不良，平均年龄和身高降低了，同时降低了人体的自然防御能力。出生缺陷、诱变、流产、抑郁和自杀、中枢神经系统疾病和其他神经系统疾病；残疾、脊柱裂、狼疮、白血病和其他类型的癌症；氯痤疮和其他皮肤问题；哮喘、过敏以及其他与呼吸和肺有关的问题；男性不育和阳痿；荷尔蒙破坏和其他内分泌疾病；儿童发展减少；长时间的高热综合征、无病灶；儿童对污染物的脆弱性增加；贫血、多发性硬化症、脑缺血、死亡... 。[1]
... 众所周知，普通刑事司法系统已承认Córdoba市Ituzaingó Anexo社区居民的投诉，并接受了该市卫生局局长提交的投诉，这些指控和指控已通过国家新闻媒体予以公布：通过空中喷洒农药造成的毒性，使该市一部分地区居民的健康遭受了严重的环境性破坏。 2009年1月，农村反思小组向国家总统夫人提交了详述文件，其中涉及全国各地农作物喷洒城镇的投诉[3]。
在Santa Fe的San Jorge，布宜诺斯艾利斯的San Nicolás，Córdoba的Ituzaingó居民区和Chaco的La Leonesa，是系统地喷洒农药变得司空见惯以来遭受和发现癌症病例、出生缺陷、生殖和内分泌疾病增加的一些地方。卫生小组成员多次主张通过喷洒农药的城镇提出居民的主张，但州公共卫生领域的回应以及州立大学的参与和参与非常稀缺且受到限制。
作物喷洒城镇的第一次全国医师会议
为了对喷洒农药的城镇的健康状况产生分析和学术以及科学反思的空间，并倾听和支持所有谴责并面对这一问题的卫生团队成员，科尔多瓦国立大学医学院，通过其两位主席（医学I部和儿科学）召集了第一次会议。
报告和证词
与会人员的陈述和讲述与喷洒药物对多种疾病和健康状况的临床观察相符。这些患者日常需求是如何应对其急性中毒的表现，在农作物喷洒的城镇中，最令医生震惊的是两个主要观察结果：首先，新生儿患先天缺陷、流产的比例高于其患者群体中的正常水平。其次，儿童和成人癌症的检出率增加，并且出现严重疾病，例如过敏性紫癜（HSP，又称过敏性紫癜、风湿性紫癜和风湿性紫癜皮肤病）、中毒性肝病，和神经系统疾病。
这些地区的医生强调，他们在相同的人群中服务的时间通常已经超过25年，但是近年来发现的情况却很不寻常，并且与系统性喷洒农药紧密相关。
例如，圣塔菲北部城市Malabrigo公立医院儿科医生兼新生儿学家Rodolfo Páramo博士强调指出，他在2006年每年发现200例新生儿中发现了12例新生儿先天性缺陷，引起了他的警觉。这种情况类似于Entre Ríos地区一个小镇Rosario del Tala的出生缺陷造成了4例死产，这两个地区都大量喷洒农药。
该会议委员会成员，Chaco省卫生部国家代表安娜·利亚·奥塔尼奥（Ana Lía Otaño）博士介绍了第一份报告的结果，强调了省一级新生儿每万名活体新生儿出生缺陷的发生率显著在增加：“1997年：19.1；2001年：28.1；2008年：85.3（畸形数/每万名活体新生儿）”。
Otaño博士提供的Chaco省儿童癌症数据，记录了其他医生在他们自己的观察中发现的结果-发病率相对于既往水平显着增加，如表2所示：“1985年：10.5；1991年：8.03；11.3；2007年：15.7（例/10万儿童）”。
《拉丁美洲先天性出生缺陷记录》（ECLAM，拉丁美洲犯罪登记中心）报告说，Misiones省有神经管缺陷的活产率为0.1/1000。但是该省Posadas医院儿童外科医生Demaio博士在他的医院记录的发生率为7.2/1000（是0.1的70倍），并且每年都在增加。他的团队对这些家庭的起源进行了地理定位，发现其赤字严重且无效，所有家庭都来自熏蒸程度很高的地区。 在Misiones患儿童癌症的情况中也观察到类似情况。...
Demaio博士强调，农用化学品对人体健康完整性造成的损害尚未确认到其实际大小；关于先天性先天缺陷，他认为我们不知道流产数量的确切范围。
Cordoba大学妇科医院妇产科和新生儿科大学医院遗传学家Gladys Trombotto教授介绍了她在该i妇科医院进行的超过111,000例活产流行病学研究结果：
从1971年到2003年，患有严重先天性先天缺陷的婴儿的比率增加了2到3倍。1991年的第一份报告5指出，每个活产儿的主要先天性先天缺陷（MCM）的发生率为16.2/%， 该比率在2003年达到37.1％。（请参见图3和图4中的示例）。 此增量具有统计意义。 Trombotto博士全面分析了导致先天性先天缺陷的所有风险因素，与生物学和医学先例有关的因素以及母亲与生活方式有关的状况，并由于缺乏统计一致性而拒绝了所有这些因素4（见图5）。
在这项研究的31年中，出生了111,000例婴儿，其中2,269例患有严重的先天性出生缺陷。 欧洲先天性出生缺陷记录EUROCAT[6]，涵盖69,635例怀孕，表明2004年至2008年的出生缺陷患病率为23.3％。拉丁美洲的ECLAMC[7]研究表明，该病的发生率为26.6％，记录的病例超过88,000。Cordoba大学妇产医院的住院率为37.1％，并且呈上升趋势。
...每年每公顷同一块土地上反复喷洒的草甘膦的数量都在增加。这可能是因为杂草已变得具有抗性。从1996年开始，每公顷的喷洒量不足2升，而今天某些地区每公顷喷洒10升，而在其他地区则每公顷喷洒近20升。
在布宜诺斯艾利斯，圣达菲（Santa Fe），Córdoba省，Entre Ríos省, Santiago del Estero省, San Luis省, Chaco省, Salta省, Jujuy省, Tucumán省, La Pampa省与Corrientes省系统喷洒除草剂的转基因作物占地2200万公顷。根据联合国UNC的地理学家的说法，至少有1200万人居住在这些广泛的土地上的农作物包围的城镇中，这一数字还不包括每个省中大城市的人口。
直接喷洒在1200万阿根廷人居住的地区。这意味着在房屋、学校、公园、水源、运动场和工作区域中喷洒了足足三亿公升农药。换句话说，喷洒到他们的生活上。这些人口受到在农作物喷洒的小镇工作的医生的治疗，在这些地区，我们注意到癌症、先天缺陷和生殖疾病增加令人震惊，再也无法掩盖。
例如，Córdoba’s Ituzaingó邻近社区的母亲和当地政府的初级保健团队2005年就对地理参照调查时就揭示了这一无可争议的现实，涉及相关社区中其他污染物外，农药起着相关作用的案例。
飞机或直升机进行的喷洒已显示会产生有毒物质的“漂流”，其扩散不受控制。实际上，欧洲议会在其第128/09号指令中禁止使用在欧盟全境用从空中喷洒农药，并规定在这方面必须修改每个成员国的法规，因为几天后能够在冰岛发现了在法国空中喷洒的农药。
... 考虑到阿根廷农用化学品的广泛使用以及在农作物喷洒的城镇中人们所观察到的脆弱的健康状况，我们认为，必须立即在全国范围内禁止所有空中喷洒农药。
另外，必须将农田上喷洒农药迁移到远离人口稠密的城镇的地方。即使喷洒的农药漂移较低，但仍可以在田野附近找到这些化学物质。因此，必须在距市区（城镇和城市）的范围不少于1000米的距离外喷洒农作物，并遵守所有特定法规。
我们认为，除了在人口稠密地区停止喷洒外，还必须禁止使用Ia（剧毒）和Ib（高毒）毒理学类型的农药。它们是真正的化学武器。
我们对当前的农业工业和转基因生产模式提出质疑。州立大学应促进和发展农业生态生产的选择。有必要研究、选择并同意允许社会和文化融合、捍卫和再现环境生态条件的生产系统。
州立大学及其医学科学院应更多地致力于其专业人员的研究和培训[29]，使他们认识到这些类型的状况和与环境有关的疾病并对其做出积极的治疗性反应。
Vazques MA, Nota C. Report from the First National Meeting of Physicians inthe crop-sprayed towns,Faculty of Medical Sciences, National University ofCordoba, August 27–8, 2010
Vazques MA, Nota C.，全国农作物喷洒城镇医师第一次会议报告，
阿根廷国立 Cordoba大学医学系，2010年8月27-28日
证据20（2018年3月）：《环境保护杂志》（J of Environmental Protection）发布阿根廷国立Cordoba大学医学院儿科诊所、病毒学研究所流行病学委员会、阿根廷国立La Plata大学精确科学学院环境研究中心Medardo Avila- Vazquez et al.《草甘膦的环境暴露和阿根廷农业人口的生殖健康影响》确认：
自从1996年将转基因大豆引入阿根廷以来，由于其商业化和易于收获[12]带来的高利润，其使用范围不断扩大，因为这种作物的种植面积增加了，草甘膦的使用也增加了。目前，阿根廷每年使用240,000吨草甘膦。由于抗除草剂杂草需要更高剂量的草甘膦，以及其他除草剂如2.4D，阿特拉津等的联合使用，这种情况比上年有所增加。[13]。这种增加导致阿根廷每人每年5公斤草甘膦成为该国所有居民的潜在接触负担，而在农业地区则更大。
阿根廷每年在工业化农业中使用240,000吨草甘膦，农业地区的医生认为发病率在发生变化；现在生殖疾病似乎占了上风。
近年来，地方政府当局以及当地居民和医生对当地自然流产，先天性异常和癌症的数量明显增加有所担心，因此要求国立 Cordoba 大学医学部评估健康状况（UNC）。
这项研究的目的是确定在一个典型的阿根廷农业小镇（MonteMaíz）中草甘膦暴露与生殖系统疾病同时发生。开展了一项生态研究，对污染源进行了环境分析，其中包括草甘膦和其他农药的测量，以及对自然流产和先天性异常患病率的横断面研究。
在土壤和谷物粉尘中检测到草甘膦，发现农村土壤中的草甘膦浓度甚至高于农业地区。该地区每年使用650吨草甘膦，并对城镇内部悬浮的土壤和尘土进行了污染，从而造成了每人每年79公斤草甘膦的环境暴露负担。我们找不到其他相关的污染源。
开始，整个城镇的外围都没有林业，取而代之的是大豆和玉米。 这些农作物经常通过地面设备和对农作物飞机喷洒进行农药处理。
Monte Maíz镇的居民获得质量非常好的饮用水，且不含砷。在有人居住的村庄内，有谷类粮仓，大豆和玉米皮从谷仓中释放出来（谷物粉尘），如图2所示，并确定了该地区使用的22处农药喷洒机和农药容器沉积物。
当地的农艺师和农用化学施药者报告说，在Monte Maíz镇周围，转基因大豆和玉米作物每年每公顷使用10公斤草甘膦。该地区每年有650吨草甘膦雾化喷洒，对草甘膦造成的环境暴露总负担为每人每年79公斤，这因农业或非农业活动以及草甘膦的空间分布而异。该地区每年总共使用975吨所有种类的农药。
化学污染物测试
在100％的土壤和谷壳（大豆、玉米）样品中检出了除草剂草甘膦及其代谢物AMPA。 如表1所示，在来自筒仓的谷壳中，草甘膦和AMPA占主导地位（505和607 ppb），其次是毒死蜱（14 ppb）和环氧环唑（2.3 ppb）。一个儿童游乐场的采样，其草甘膦含量比N˚5站点（抗草甘膦玉米农田）高68倍。 同样，在靠近农药沉积物的人行道上取样的土壤样本N˚8中，草甘膦（3868 ppb），AMPA（3192 ppb）和所有农药的浓度最高。
草甘膦在所有研究基质中的浓度也最高（3868 ppb），远远超过其他农药：硫丹II（337.7 ppb）和毒死蜱（242 ppb）（见表1）。饮用水中的农药浓度最低；此外，饮用水中的砷含量还不到5 ppb。
最近5年中，在981名接受调查的育龄妇女中发生了98例自然流产； 其中62例仅发生1次事件；15例发生2例，其中2例发生3例流产；意外流产率为每100个育龄妇女10％。接受调查的981名妇女中发生过自然流产者为79名妇女（占8％）。
在过去的10年中，研究的人口中共有853例出生，有25名儿童出现了先天性严重异常并在进行该项研究时还存活（四个神经系统异常，五个生殖器异常，四个肢体异常，三个肾脏和泌尿系统异常，两个消化系统异常，4例心脏疾病和1例胆道闭锁、唇裂和甲状腺舌囊肿）。总患病率为3％（表3），但是不包括在此期间死亡的畸形儿童。如果包括死者在内（按十12例计算），先天异常的发生率将达到4.3％...。
蒙特·麦兹（Monte Maíz）展示了这种农业模式的影响，以及该地区的生产繁荣，其人口中的高生活水平以及村庄中当地农民的安置。这些农民离开农村地区，与家人一起搬家，搬走了工作设备和用品。村庄内部的农业设备沉积物正在增加（总共22个），镇上最大的沉积物位于R15，并且是五个农药储存地点。每年有650吨草甘膦被浓缩，处理并包围了该镇，该镇现在面临着每天喷洒的田地。草甘膦在100％的土壤和果壳粉尘样品中被发现，其浓度是其他农药的10倍，这表明在所有污染环境的农药中，草甘膦是最普遍的。内城区发现的浓度比耕地土壤中的浓度高出几倍（见表1），再次证明了该镇位于喷洒区域的运营中心。草甘膦的谷物粉尘含量也很高，它还伴随着其他农药的共同存在，因为草甘膦用于园艺，因此草甘膦在村子里丢弃率很高。
Monte Maíz五年内的自然流产率（10％）比国家卫生部2005年进行的国家分析报告的自然流产率（每年0.6％）高出三倍[15]，也高于由我们的团队在Cordoba附近进行的一项社会健康调查（2016年），该地区在5年中自然流产的发生率为3.7％[16]。
这种增加的患病率与Aiassa等人的发现一致。他们在距离蒙特迈兹（Monte Maiz）180公里的Las Vertientes地区发现有166户家庭的Cordoba镇的自然流产率为19％[17]。另一项 “安大略省农场家庭健康研究”发现，在怀孕前容易接触草甘膦的农场家庭中，自然流产的比率为18.7％[18]。
类似于Settini在意大利对草甘膦观察的结果[19]，或2007年在加拿大麦克马斯特大学获得博士学位[20]，并在2012年更新[21]的Sanborn等人的循证医学系统评价，暴露于包括草甘膦在内的农药与流产之间似乎存在明确的联系。
另一方面，阿根廷国家先天性异常国家注册局（RENAC）在2014年的报告中指出，在281.249例新生儿中，总共记录了4.120例严重的结构性先天性异常，患病率为1.4％[9]；在蒙特迈兹（Monte Maiz），患病率（3％）是全国患病率的两倍（见表3）。
值得一提的是，我们的数据还不包括死亡的畸形儿童，否则差异肯定会更大。先天性异常的类型与整个省的RENAC报告的类型没有显着差异[9]。
我们的研究验证了阿根廷农业村庄中高浓度的草甘膦环境暴露与生殖疾病（自然流产和先天性异常）的发生率增加有关，但无法断言原因。为此目的，需要进行对为此设计的进一步研究。
Medardo Avila-Vazquezet al., Environmental Exposure to Glyphosate and
Reproductive Health Impacts in Agricultural Population of Argentina.
J of Environmental Protection. March 2018Vol.9 No.3
Medardo Avila-Vazquezet al.，草甘膦的环境暴露和阿根廷农业人口的生殖健康影响。
环境保护杂志。2018年3月；9(3)
https://www.scirp.org/Journal/PaperInformation.aspx?PaperID=83267
证据21（2019年4月）：《出生缺陷研究》（Birth Defects Res. ）发表美国北卡罗来纳州美国环境研究三角公园研究与发展办公室；美国环境保护局国家环境评估中心；耶鲁大学公共卫生学院生物统计学系；北卡罗来纳大学教堂山分校、北卡罗来纳州Gillings全球公共卫生大学生物统计学系、妇幼保健系北卡罗来纳州卫生与公共服务部公共卫生司；纽约州 Mount Sinai市Icahn医学院儿科系环境医学与公共卫生系、妇幼保健系、儿科系；佛罗里达州立大学佛罗里达州立大学医学院行为科学与社会医学系、统计系KM. Rappazzoet al.《2003-2005年北卡罗来纳州出生队列中特定农业农药有效成分和出生缺陷的孕妇居住暴露》确认：
出生缺陷占活产婴儿的3％（Mai et al., 2013），是婴儿死亡率的主要原因，并且在整个发育过程和生命过程中造成持续的健康问题（Decoufle, Boyle, Paulozzi, & Lary, 2001;Matthews & MacDorman, 2013）。 尽管大多数先天缺陷的危险因素尚不清楚，并且因缺陷而异，但孕产妇特征、药物、遗传学和环境因素都与先天缺陷的发生有关（CDC, 2018）。了解导致出生缺陷的因素可以导致更好的干预措施和公共卫生保护。
怀孕前或怀孕期间的农药暴露是与出生缺陷有关的环境因素之一 (Agopian, Cai, Langlois, Canfield, & Lupo, 2013;Agopian, Langlois, Cai, Canfield, & Lupo, 2013;Agopian, Lupo, Canfield, & Langlois, 2013;Carmichael, Yang, et al., 2014;Carmichael et al., 2013;Garry et al., 2002;Heeren, Tyler, & Mandeya, 2003;Kielb et al., 2014;Kristensen, Irgens, Andersen, Bye, & Sundheim, 1997;Meyer et al., 2006;Ochoa-Acuna & Carbajo, 2009;Rull, Ritz, & Shaw, 2006;Shaw, Wasserman, O’Malley, Nelson, & Jackson, 1999;Shaw et al., 2014)。
在此分析中，我们将对先前的工作进行扩展，以包括估计的北卡罗来纳州常用的特定农药活性成分的暴露量。通过结合居民对农作物的接近度和农药使用数据来估算这些活性成分的暴露量，并计算与已知出生缺陷的相关性。
先前已描述了用于分析的研究人群（Rappazzo et al., 2016;Warren et al., 2014），其来源是北卡罗莱纳州国家健康统计中心。 简要地说，从2003年1月1日到2005年12月31日，北卡罗来纳州的基本人口为335,729个地理编码的单例活产儿； 出生限于那些居住在北卡罗来纳州（排除数n = 23,829），胎龄在20-45周之间（排除数n = 84），并且具有有关所有感兴趣的人口统计学特征的数据（排除数n = 6,910），只有一个分析人群 304,906名单胎活产（Rappazzo et al., 2016;Warren et al., 2014）。
在我们之前的分析中，有10种类型出生缺陷（共检查了42种类型）与总农药暴露呈正相关（Rappazzo et al., 2016）。 这些先天缺陷在这里用作结局种类：心脏房间隔缺损（ASD，继发性房间隔缺损，与卵圆形未闭孔分开），动脉导管未闭（PDA）（出生体重> 2500克），发育不良左心综合征（HLHS），气管食道瘘管（TEF），肥厚性幽门狭窄（HPS），先天性巨结肠症（Hirschsprung’s disease），尿道下裂，上肢和下肢缺陷以及胸膜闭锁。
结果：
表2a、与草甘膦暴露相关性最高的畸形类型：心脏房间隔缺损（ASD）、动脉导管未闭（PDA）、肥厚性幽门狭窄（HPS）、尿道下裂（Hypospadias）。
表2b、与草甘膦暴露相关性最高的畸形类型：发育不良左心综合征（HLHS）、气管食道瘘管（TEF）、鼻后孔闭锁（Choanal Atresia）、先天性巨结肠症（Hirschsprung’s disease）、上肢缺陷、下肢缺陷。......
在我们检查了7种农药活性成分和10种出生缺陷之间的联系时，我们观察到了跨越出生缺陷和农药的几种正相关，特别是在较高的暴露水平下，几种农药出生缺陷对显示出单调递增的联系。 然而，没有一种特定的农药活性成分出现与所检查的所有出生缺陷有关，并且在出生缺陷和农药活性成分之间缔合的方式各不相同。 虽然对农药共同暴露的调整使OR趋于零，但在单一农药模型中呈阳性的关联通常保持不变，因此在针对其他农药活性成分进行调整的模型中。...
对于草甘膦，关于生殖健康结局的研究非常有限。在人类中，草甘膦与先天缺陷有着不同的联系，少数研究没有明确的关系（de Araujo, Delgado, & Paumgartten, 2016）。在斑马鱼中，草甘膦暴露导致心脏异常（Roy, Ochs, Zambrzycka, & Anderson, 2016），抑制碳酸酐酶活性并导致身体畸形（Sulukan et al., 2017）。
KM. Rappazzoet al., Maternal Residential Exposure to Specific Agricultural Pesticide Active Ingredients and Birth Defects in a 2003-2005 North Carolina Birth Cohort.
Birth Defects Res. 2019 Apr 1; 111(6): 312–323
KM. Rappazzoet al.，2003-2005年北卡罗来纳州出生队列中特定农业农药有效成分和出生缺陷的孕妇居住暴露。出生缺陷研究。2019年4月；111(6): 312–323
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6445756/
6、法国暴露草甘膦除草剂造成新生儿畸形案例
证据22（2010年5月）：《职业环境医学》（Occup Environ Med.）发表法国Caen大学生物化学实验室、法国基因工程研究与独立信息委员会（CRIIGEN）R Mesnage,G-E Séraliniet al.《两例接触多种农药后出生缺陷重叠Stratton-Parker综合征》确认：
2009年1月，一对农业夫妇与我们联系，因为他们的三个孩子中有两个出生时患有先天性畸形。其中一个出生时患生长激素缺乏症、肛门无孔和信中房间隔缺损。另一个患尿道下裂、小阴茎、生长激素完全缺乏和肛门无孔。这些疾病很少在同一个人或家庭中一起遇到。但是，在某些情况下，它们已被归类为Stratton-Parker综合征下的其他症状，其病因尚不清楚。[12]
... 在我们的病例中，迄今为止尚无已知的家族先例或遗传起源，因此可以推测环境起源。尤其是在怀孕期间，这个家庭使用了许多农药。
父亲在没有保护的情况下每年喷洒了1.3吨以上的农药（包括300升草甘膦除草剂），其中含有众所周知的内分泌干扰物，如多菌灵、2,4-二氯苯氧乙酸、草甘膦、碘克腈、亚麻嘧啶、三氟拉林和长春新碱。全家与父亲保持着密切联系，食用了他们花园里的产品，还暴露于喂养的猪和家禽产品。
... 这个家庭接触了多种农药配方制剂，这些配方本身就是不同化学物质的混合物。制剂中的佐剂可能会放大活性成分的毒性[4]，可以像大多数污染物一样协同作用[5]。
例如，父亲喷洒的某些抗雄激素化学物质（如长春新碱）可以与其他抗雄激素协同作用，对实验动物的雄性生殖发育产生累积影响[6]。农药体内实验的结果可以解释和/或在重复至少部分是这个家庭的症状。这些农药混合物的不利影响大于其单独成分的影响之和。因此，在我们的案例中，我们不能排除在父母配子发生或怀孕期间在表观遗传、遗传或生理水平上内分泌干扰物混合物的作用。
Mesnage, G-E Séraliniet al., Two cases of birth defects overlapping Stratton-Parker syndrome after multiple pesticide exposure. Occup Environ Med. 2010 May;67(5):359.
R Mesnage, G-E Séralini et al.，两例接触多种农药后出生缺陷重叠Stratton-Parker综合征。
职业环境医学。2010年5月；67(5):359.
https://oem.bmj.com/content/67/5/359
证据23（2012年9月）：《环境保护杂志》（J Environmental Protection）发表法国 Caen大学生物化学实验室、法国基因工程研究与独立信息委员会（CRIIGEN）、法国Limoges大学医院药理与毒理学科R Mesnage, G-E Séralini et al.《一个农民家庭中的草甘膦暴露》确认：
我们以前曾报道过一个农民家庭中的两例先天性缺陷，包括肛门穿孔、生长激素缺乏症、尿道下裂、心脏缺陷和微阴茎[1]。这种模式很少被描述，并且与Stratton-Parker综合征重叠，其病因仍有待讨论[2]。也可能涉及其他病理，例如猫眼综合症[3]。通常认为它们源于遗传，尽管可能受环境因素的促进或引发，因为表型症状可能与已知的染色体异常无关。
我们想知道是否可以检测到农民喷洒农药后是否能检测到他与他的家人暴露于农药的浸迹，以及如何与何时造成。内分泌干扰物在胚胎发育中的作用，包括表观遗传学作用，已得到充分文献证明[4]，因此在这种情况下更可能会受到质疑。
我们以前已经证明了草甘膦除草剂（GBH）引起的内分泌干扰[5]。草甘膦除草剂是该农民使用的主要农药，可以作为农药暴露的相关生物标志物。在这里，我们测试了父亲是否排泄草甘膦除草剂。草甘膦除草剂是一种主要的除草剂，不仅在该农场而且在全世界都使用。我们在他按照常规农业喷雾操作之前，期间和之后进行检测。我们还检测了远离农田的农民妻子和三个孩子是否受到污染。
方法：...使用配备有电喷雾电离源的ThermoFisher Scientific公司（所在地：美国加州San Jose）的LTQ线性离子阱质谱仪进行质谱分析。尿液检测和定量限分别为1和2 µg / L（ppb）。
结果
这位农民一家人居住在距离农田1.5公里的地方。农民用拖拉机喷洒机在3块农田上喷洒了55升不同浓度的草甘膦除草剂。此外，他还用手动喷雾器喷0.75升草甘膦除草剂。稀释制剂期间，他戴着口罩和手套，但是从拖拉机上喷洒时没有戴口罩和手套，而且，他还打开了拖拉机的窗户。手动喷洒时，他戴着手套，但没有戴口罩或防护服。处理农药4小时后，他回家与家人一起吃饭，仔细洗了手，换了衣服。但是，他没有洗澡。
从喷洒时直至两天后，很容易在父亲的尿液中检测到草甘膦（图1）。喷洒处理开始后7小时达到9.5 µg / L峰值，相当于操作结束后3小时。喷洒两天后，尿液中草甘膦发现稳定在2 µg / L。父亲的尿液中每24小时的草甘膦平均浓度在第0天，第1天和第2天分别为4.35、0.95和1.9 µg / L。这时在一个孩子尿液中也发现了2 µg / L的草甘膦。
在所有样品中均未检测到氨基甲基膦酸（草甘膦的主要代谢产物）。 草甘膦尿液浓度通过HPLC-ESI-MS测量。绘制了父亲的草甘膦尿动力学（实线）。
母亲和两个孩子中未检测到草甘膦水平。喷洒后两天，第三个孩子尿液中草甘膦的浓度为2 µg / L（ppb）。检测限（LOD）和定量限（LOQ）分别为1和2 ppb。
讨论
在这里，我们证明了在一位常规处理农药的农民喷洒草甘膦除草剂之后，被污染了草甘膦。一次处理后，发现尿液有两个时期的草甘膦排泄。暴露后5 h的第一个高峰可以通过快速吸入或口服途径来解释[6]，然后消除可检测的化合物。24小时后，第二个可检测到的增加可能与所施用农药的一小部分通过皮肤吸收有关[7]。这可以解释两次排泄强度不同的农药吸收率不同的情况[8]。这是毒物动力学研究中必须考虑的关键因素。据我们所知，我们首次报告这样的草甘膦除草剂人体暴露情况。
在大鼠中口服草甘膦后，在2小时后达到峰值。
令人惊讶的是，即使他的三个孩子中的一个也生活与农田距离很远，孩子的尿液中仍存在可检测到的草甘膦。这可能是由于与父亲的长时间接触，例如皮肤接触。对于农民及其家人暴露草甘膦的检测结果，表明整个家庭都取决于防护情况暴露于农药中[9,10]。这项工作中的草甘膦除草剂残留水平与农业暴露后的尿液浓度相对应，从几ppb到233 ppb（几何平均值2.3 ppb）[9]。
在我们的工作中，草甘膦除草剂农达（Roundup）对细胞具有抗雄激素作用，浓度为0.2 ppm以至更高与佐剂混合的草甘膦，其浓度比这些测定法中检测到的浓度高20倍。但是，这种情况在24小时内发生，并且没有考虑到组织中的生物蓄积、长期影响以及与其他喷洒农药的综合影响。
越来越多的父亲暴露被认为是农药介导的生殖细胞改变引起的出生缺陷的原因[11,12]。 但是，农民缺乏预防措施也让他们的家庭暴露了。通常，在草甘膦喷洒过程中很少采取预防措施，这在世界范围内都是如此。父亲回答说，由于他的家和农田之间的距离，无法想象自己的家人也接触这些农药。
Robin Mesnage, Gilles-Eric Séralini et al., Glyphosate Exposure in a Farmer’s Family,
J Environmental Protection, Sep 2012; 3(9)
Robin Mesnage, Gilles-Eric Séralini et al.，一个农民家庭中的草甘膦暴露，
环境保护杂志。2012年9月；3(9)
https://www.scirp.org/journal/PaperInformation.aspx?paperID=22645
7、2010年以来，美国华盛顿州Yakima县、Benton县与Franklin县异常多新生儿无脑症与草甘膦密切相关
证据24（2013年7月）：《ABC新闻》（ABC News）报道《华盛顿州卫生官员被高缺陷率困扰》确认：
很高的出生缺陷率使华盛顿的卫生官员感到困惑，他们无法找出原因。
华盛顿州卫生部周二发布的一份报告说，自2010年以来，邻近的Yakima县、Benton县与Franklin县异常多怀孕人数受到出生缺陷性无脑症的影响，导致新生儿的大脑严重发育不良。
在美国，每10,000例年出生的婴儿大约有一到两个无脑病例。然而，在三个人口总计约515,000的华盛顿县中，卫生部门发现，从2010年1月至2013年1月，报告的病例异常多，每10,000例分娩中大约有8例无脑。
无脑是一种先天缺陷，几乎总是致命的，胎儿的神经管无法正确闭合。结果，胎儿大脑的前部不发育，而大脑的另一部分则暴露于羊水，从而造成进一步的损害。发育缺陷的大多数胎儿死产。那些能够存活下来的人通常在出生后不久就死亡。
孕妇饮食中缺乏足够的B-维生素叶酸可能会导致无脑症。但是，地方疾病预防控制中心和州卫生部门的官员发现，孕妇因先天缺陷而受到影响的妇女和健康怀孕的妇女所服用的补充叶酸的量没有显着差异。
Gilian Mohney, Washington State Health Officials Stumped by High Rate of Birth Defects,
ABC News, 17 July 2013
Gilian Mohney，华盛顿州卫生官员被高缺陷率困扰。ABC新闻，2013年7月17日
证据25（2016年12月）：美国地质调查队（USGS）发表《科学调查报告2007-5180：农药的发生和分布》确认：
在2000年的生长期，Yakima 河流域的农作物估计应用了146种有机农药[2]（表3）。
估算值基于国家农业统计局（NASS）的县级农业统计数据，并在与Kittitas，Yakima和Benton县的私人作物化学顾问和农业推广机构的访谈中进行了验证和纠正。关于通行权申请的数据是从州和地方交通运输部门以及灌溉区获得的。农药汇编的详细信息由Ebbert和Embrey（Ebbert and Embrey， 2002）提供。
在本研究中分析了146种施用农药中的75种（占51％），在这75种农药中，检出了47种（占63％）。只有草甘膦（Roundup®，Rodeo®）大量施用，但本研究未进行分析。
USGS, Pesticide Occurrence and Distribution, Scientific Investigations Report 2007–5180,
U.S. Geological Survey, 01 Dec, 2016
USGS，农药的发生和分布，科学调查报告2007-5180，美国地质调查队，2016年12月1日
https://pubs.usgs.gov/sir/2007/5180/section3.html
证据26（2004年4月）：《流行病学》（Epidemiology）发表美国加州大学洛杉矶分校Rull, Rudolph P.《神经管缺陷与孕妇居住区靠近农用农药的应用》确认：
我们评估了1987年至1991年在加利福尼亚州出生的两个出生队列中确定的59种农业农药对母亲的环境暴露对神经管缺陷（NTD）的影响。
评估了受孕月附近发生的农药施用距离1,000米以内的母亲居住区，使用基于链接的加利福尼亚农药使用报告（PUR）和土地使用调查图的地理模型来提高PUR的空间分辨率。为了调整多次比较和相关的农药暴露，我们采用了分层逻辑回归，评估了具有相似理化特性的亚组中的药物，并将估计值与从常规逻辑模型获得的估计值进行了比较。
此外，我们估计了两种主要的神经管缺陷（NTD）亚型无脑症和脊柱裂的单独暴露效果，并针对这些结果采用了多级分层模型。与传统的逻辑模型相比，基于层次模型的效果估计的精度大大提高，因为效果估计已缩小为子组的平均值。
单个农药的暴露率很低（例如，灭多威的暴露率最高，在731例病例中为8.6％，在940例对照中为5.6％），因此限制了我们检测特定农药影响的能力。...草甘膦（OR：1.50; 95％CI：1.00，2.40）（表2）。
在多层次模型中检查NTD亚型，我们还观察到以下有机磷化合物的关联：毒死蜱（OR：1.54; 95％CI：0.87，2.73）与脊柱裂和草甘膦（OR：1.55; 95％CI：0.85， 2.85）与无脑症（OR：1.95; 95％CI：0.89，4.28）。
Rull, Rudolph P.et al., Neural tube defects and maternal residential proximity
to agricultural pesticide applications. Epidemiology. July 2004; 15(4)
Rull, Rudolph P.et al.，神经管缺陷与孕妇居住区靠近农用农药的应用。
流行病学，2004年7月；15(4)
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16495467/
证据27（2017年7月）：《神经学与神经生物学杂志》（J Neurol Neurobiol）发表麻省理工学院计算机科学与人工智能实验室、浸入式健康自然疗法独立学者Seneff S, Nigh GL《草甘膦和无脑症：千割之死》确认：
在2010年1月至2016年1月之间，在华盛顿州的Yakima县, Benton县与Franklin县确认有42例无脑婴儿。在这段时间内，这些县的无脑率明显高于美国总人口的无脑率。 2012年和2013年的发病率特别高。Yakima河是Yakima河谷的主要灌溉水源，流经无脑率异常高的所有三个县。从2009年开始，Benton县杂草委员会从能源部获得了一笔赠款，用于控制Yakima河流域的一种有害的入侵杂草，称为开花高峰[26]。人们担心这种杂草会阻碍娱乐活动，对灌溉系统和湿地产生负面影响，并改变水生食物网。
在接下来的四年中，用草甘膦除草剂反复处理了六英里的海岸线，由于被认为无毒，因此被认为是最佳选择。草甘膦还用于防治其他水杂草，例如紫色和魔杖珍珠菜和日本虎杖。在Yakima河谷，草甘膦的最高施用量是在2012年和2013年，即无脑畸形发生率高峰期。
草甘膦破坏神经发育与造成新生无脑畸形密切相关的证据
锌缺乏症
孕妇血清锌水平低与无脑和其他先天性畸形密切相关[31-35]。草甘膦是一种公认的强矿物螯合剂。实际上，由于这个原因，它首先获得了管道清洁器的专利[36]。 在所有必需矿物质中，草甘膦-铜复合物和草甘膦-锌复合物具有最高的稳定性常数[27,28]...。
维生素B12
降低的血清B12（钴胺素）与无脑症有关已有近40年的历史。 草甘膦可能通过酶促抑制和钴离子螯合而造成这种营养素的缺乏。 1980年发表在《柳叶刀》上的一封信中[51]首先被提出维生素B12的缺乏与神经管缺陷（NTD）关联。... 最近，Molloy等人（Molloy et al., 2009）证实进入妊娠的妇女中脑B12最低水平的婴儿脑中分娩数量过多，这一风险再次被发现与红细胞和血清叶酸无关[53]...。
研究表明，草甘膦可通过抑制ALA脱水酶（ALA-D）来抑制δ-氨基乙酰丙酸（ALA）的产生，ALA脱水酶是叶绿素和其他卟啉环化合物合成中的限速起始步骤[54]。 在暴露于草甘膦的农场工人中，ALA-D活性已被显着降低[55]。 ALA的生物合成是在动物体内生产维生素B12和血红素的第一步，这是由于它在构建两个分子共有的吡咯环中起着核心作用[56]。 没有专门针对草甘膦消耗维生素B12的研究，但有文献记载其对吡咯合成的干扰以及其对合成维生素的益生菌的消耗，极有可能破坏其供应。
叶酸
有力的证据支持叶酸在神经发育中起关键作用的观点。 草甘膦的除草作用至少部分是由于其抑制the草酸酯途径[64,65]，莽草酸酯途径在植物和细菌中有活性，但在动物中不存在[66]。 然而，植物乳杆菌和人类微生物组中的重要物种双歧杆菌的几种物种均已显示出可生物合成叶酸。 叶酸产生双歧杆菌的益生菌制剂导致大鼠血清中叶酸水平升高[67]。 一项相同补充剂的人体试验提高了粪便中的叶酸水平。 草甘膦对莽草酸酯途径的抑制作用将减少这些细菌对孕妇血清叶酸的贡献。 此外，对家禽肠道微生物组的研究表明，双歧杆菌和乳杆菌物种特别容易受到草甘膦毒性的影响[68]。 ...
维甲酸
1967年首次描述视黄酸（RA）的致畸活性。在该实验报告中，每天的9-11个孕日中每天接受5 mg RA的怀孕鼠生下的19只鼠仔只有一只为活胎，而且为无脑和腭裂畸形[69]。从那时起，人们已经发现大量有关RA在正常胚胎发育及其对先天性缺陷的贡献中的作用。草甘膦直接增强了RA的作用，在胚胎发生过程中接触草甘膦会特别通过其对RA信号传导的影响而导致致畸作用。这些影响包括小头畸形、全前脑畸形（大脑发育为半球的失败）和头脑畸形（鼻子发育为完全的失败）[19]。草甘膦对肝脏中能降解RA的CYP酶的影响[71]可能导致RA在裸露的母亲体内蓄积，破坏了胚胎的微调时序控制，并增加了刚才提到的增强RA信号活性的伤害。 ...
蛋氨酸
叶酸只是控制甲基化能力的众多因素之一。 更普遍地，较大的甲基化途径的代谢问题隐约可见神经管闭合的损害[73]。 除破坏叶酸的合成外，草甘膦还引起蛋氨酸的缺乏，这在体外研究中已显示出对于神经管闭合至关重要。... 对胡萝卜细胞系的一项研究表明，暴露于草甘膦后蛋氨酸和芳香族氨基酸缺乏[75]。 草甘膦可抑制多种酶，这些酶参与大肠杆菌中无机硫酸盐同化成蛋氨酸[76]。...
维生素D
过去的二十年中，随着草甘膦在核心农作物上的使用增加，维生素D缺乏症已成为全球性问题[78-80]。 肝脏中的CYP酶将维生素D激活为肝脏中的25（OH）D3。 草甘膦已显示出抑制肝脏CYP酶活性的作用[20]，并且可以预测这会通过削弱激活来诱导维生素D的缺乏。...
糖尿病，无脑症和草甘膦
Swanson等（Swanson et al., 2014）发现在过去的二十年期间，糖尿病发病率的上升与核心农作物使用草甘膦的上升之间存在非常密切的相关性[12]。Samsel 与 Seneff（Samsel and Seneff, 2016）[8]基于胰岛素受体中必需甘氨酸的替代，讨论了草甘膦引起II型糖尿病的机制。胰岛素受体包含至少8个重复的高度保守的甘氨酸中心基序[82]，这对于转运至质膜至关重要[83]。
先天缺陷与孕妇糖尿病之间的相关性已被关注近50年[84]，而Reece等人（Reece et al., 1985）建立了孕妇高血糖与神经管缺陷（NTD）之间的更具体联系[85]。随后的研究证实了这种关联并将其扩展到包括肥胖症在内[86,87]。肥胖与神经管缺陷（NTD）之间的因果关系尚未完全确立，但高胰岛素血症可能起了作用[88]。Ray等（Ray et al., 2005）发现，在妊娠前饮食中饮食摄入高血糖指数最高的肥胖妇女，胎儿发育过程中NTD的风险要高出4倍以上。
......
结论
有多种途径导致新生儿无脑症畸形，每一种途径都可能受到草甘膦的不利影响。草甘膦已知的金属螯合特性以及对肠道微生物的不利影响导致几种维生素、矿物质和氨基酸蛋氨酸的缺乏，所有这些都与无脑症有关。草甘膦会对丝氨酸蛋白酶产生不利影响，而丝氨酸蛋白酶对于发育至关重要。草甘膦已显示出诱导氧化应激，这导致金属蛋白酶螯合锌和随后的锌缺乏。农作物中草甘膦的使用与世界范围的糖尿病流行密切相关，而母体糖尿病是无脑的重要危险因素。草甘膦引起的多种激素和酶失调以及同型半胱氨酸代谢受损，导致与脑无脑有关的胎儿垂体和肾上腺病理。草甘膦对适当的LDL受体完整性和整体稳态的多重影响是另一个危险因素。尽管许多证据仍属偶然，但我们认为，此处提出的大量论据表明
迫切需要进一步的研究来确认或否认这些联系。
预防原则指出：“如果一项行动或政策有可能对公众或环境造成损害的可疑风险，在没有获得科学共识的情况下，则举证责任在认为无害采取行动一方”[217]。
基于草甘膦的除草剂（GBH）已在商业和居民区应用了近45年。 本文审查的证据提供了草甘膦可能通过这些途径损害胚胎和胎儿的发育的许多非常特殊的途径，从而显着增加导致无脑症风险，而关于草甘膦的流行病学和动物研究支持与大脑神经发育受损的联系。
尽管全球越来越多的政府监管机构对草甘膦除草剂的使用施加了限制，尽管安全问题日益严重，但美国和其他国家/地区但仍继续允许草甘膦除草剂的广泛使用，本文在这里仅审查了其中只有一小部分问题。
考虑到怀孕期间新生儿无脑症的严重性，我们强烈鼓励监管机构遵循“预防原则”暂停草甘膦除草剂的商业性和居民区使用，直到审查清楚最终证明草甘膦在本文中描述的导致无脑症的任何途径与其他令人信服的其他病理联系中均无联系不起作用为止。
Seneff S, Nigh GL, Glyphosate and Anencephaly: Death by A Thousand Cuts.
J Neurol Neurobiol,18 Jul 2017;3(2)
Seneff S, Nigh GL，草甘膦和无脑症：千割之死。神经学与神经生物学杂志，
2017年7月18日；3(2)
https://sciforschenonline.org/journals/neurology/JNNB-3-140.php
8、阿根廷国立科学技术研究委员会等机构团队2018年6月研究：“围产期暴露于低剂量的GBH会损害雌鼠生殖能力，并导致F2（孙代）胎儿发育迟缓和先天性结构异常”，但子代没有发现这样的畸形。《自然杂志 - 科学报告》2019年4月发表华盛顿州立大学生物学学院生殖生物学中心团队研究：“草甘膦可以诱导疾病和生殖系（如精子）的代际遗传。观察表明，在后代的疾病病因学中必须考虑草甘膦的跨代毒理学”。
证据28（2018年6月）：《毒理学档案》（Archives of Toxicology）发表阿根廷国立科学技术研究委员会（CONICET）、阿根廷化学残留物和污染物的研究和分析计划（PRINARC）、阿根廷圣菲化学工程学院（UNL）María M. Milesiet al.《围产期接触草甘膦除草剂会损害在Wistar大鼠中雌性生殖结果并诱发第二代不良反应》确认：
不孕症仍然是全球高度流行的疾病，据估计，它影响了全世界超过10％的妇女（WHO, 2017）。 此外，在三分之一的不育夫妇中未发现具体原因（Macklon, 2017）。 越来越多的证据表明，某些生活方式因素和对内分泌干扰物（EDC）的环境暴露的增加可能会导致生殖健康问题的发生趋势（Den Hond et al., 2015; Ziv-Gal and Flaws, 2016）。
流行病学研究表明，环境和/或职业性接触农药与男性和女性生殖不良状况之间有着密切相关性（Chevrier et al. 2013; Mostafalou and Abdollahi 2017）。 对生殖健康结局的一些有害影响包括：生育力下降，流产，死产，低出生体重或出生缺陷（Chiu et al. 2015; García et al. 2017; Rappazzo et al. 2016; Razi et al. 2016）。
草甘膦基除草剂（GBHs）是全球使用最广泛的除草剂，会增加环境暴露的风险。在这里，我们调查了围产期低剂量GBH暴露是否会改变雌性生殖能力和/或诱发与先天性异常或生长改变有关的第二代效应。
本研究中使用的草甘膦制剂是由Grupo Agros S.R.L.在阿根廷销售的MAGNUM SUPER II。 它是一种液态水溶性制剂，含有66.2％的草甘膦钾盐（相当于54％w / v的草甘膦酸）作为其活性成分，助剂和惰性成分。选择该GBH是基于以下事实：它是我国最常用的除草剂之一，并且它代表了高草甘膦含量的配方，可防止难以根除的杂草。
怀孕大鼠F0（母代）从妊娠第9天到断奶为止期间每天通过食物接受草甘膦除草剂（GBH），低剂量组（GBH-LD）剂量为2毫克/kg体重，高剂量组（GBH-HD）为200毫克/kg体重。
表1. 连续三天（食物替代期）膳食基质中的草甘膦浓度（mg/kg)：
低浓度组（GBH-LD）: 第1天：21±1；第2天：22±1；第3天：20±1。
高浓度组（GBH-HD）第1天：2688±77；第2天：2699±103；第3天：2540±53。
哺乳期结束时（LD21），怀孕F0（母代）雌鼠中的草甘膦平均血清浓度为：低浓度组（GBH-LD）为0.039±0.006 mg / L，高浓度组（GBH-HD）为3.8±1.2 mg / L。 同样，值得注意的是，在比较来自高浓度组与低浓度组的怀孕F0（母代）雌鼠血清中草甘膦浓度时，观察到了100倍的差异。至于AMPA血清浓度，在低浓度组（GBH-LD）和高浓度组（GBH-HD）处理的怀孕母代F0雌鼠中均未发现草甘膦的主要代谢产物AMPA，即低于能检测到的水平。
记录F1（子代）雌性的体重增加和阴道管开放。性成熟的F1（子代）雌性进行交配以通过评估妊娠率来评估其生殖性能，而在妊娠第19天（GD19），对黄体的数量、植入位点（IS）和吸收位点也进行评估。为了分析对F2（孙代）的影响，我们分析了GD19的胎儿形态，并评估了胎儿的长度和体重以及胎盘重量。
草甘膦除草剂（GBH）暴露既不会改变F1（子代）的体重增加，也不会改变其阴道开放性。尽管所有暴露于GBH的F1（子代）大鼠都已怀孕，但可以检测到较少的植入位点（IS）。
两个GBH组的F2（孙代）均显示出生长延迟，这是由胎儿体重和身长的降低证明的，这与更多胎龄胎儿体小有关。此外，在高剂量组（GBH-HD）怀孕鼠的F2（子代）后代中发现更高的胎盘重量和胎盘指数。
围产期草甘膦除草剂（GBH）暴露的F1（子代）雌性在GD19上的生殖性能：
围产期暴露于低浓度组（GBH-LD）和高浓度组（GBHHD）剂量不会影响F1（子代）雌鼠的妊娠率（图3a）。在GD19上进行的育性测试未显示黄体（CL）的数量（CLs /大鼠：11-13）（图3b）或吸收位点的数量（图3c）都没有变化。但是有趣的是，暴露于草甘膦除草剂（GBH）低浓度组与高浓度组均显示出较少的植入位点（图3e）。当我们分析植入前损失的百分比（即未受精的卵母细胞数或植入前胚胎丢失），暴露于草甘膦除草剂（GBH）低浓度组与高浓度组中均检测到显着增加（图3d）。
在暴露于低浓度组与高浓度组的一些F1（子代）雌鼠中发现了特殊效果，这些雌鼠表现出单侧怀孕。实际上，低浓度组（GBH-LD）的20只大鼠中有2只，高浓度组（GBHHD）的20只大鼠中有3只，即使没有怀孕的卵巢中的黄体（CL）数目，胚胎植入也只发生在一个子宫角中，尽管未植入的子宫角正常。但是，这些发现并未显示出统计学上的显着性（图3e-GBH-HD）。
由于围产期口服草甘膦除草剂（GBH）影响F1（子代）雌鼠的生殖能力，我们通过分析胎儿胎盘参数来研究它是否也可能对其后代的发育产生影响。
我们检测到暴露于两种剂量草甘膦除草剂（GBH）的F1（子代）雌性中的F2（孙代）胎儿（胎儿/窝：对照组，n = 213/20； GBH2，n = 152/15； GBH200，n = 117/13）显示出身长和身体均减少重量（表4）。
从体重频率分布曲线中，我们发现低浓度组（GBH-LD）和高浓度组（GBHHD）的F2（孙代）胎儿分别为低体重（SGA）胎儿（即体重<10％）的比例为57.5％和48.2％。 在对照组中，只有23.7％的胎儿是低体重（SGA）胎儿。 成为低体重（SGA）胎儿的相对风险为2.43 [95％CI（1.66，3.55）； 对于低浓度组（GBH-LD）F2（孙代）胎儿和2.04 [95％CI（1.33，3.12），p <0.0001]； 对于高浓度组（GBHHD）F2（孙代）胎儿，p = 0.0012]。图4显示了这样变化的图像。
令人惊讶的是，在高剂量组（GBH-HD）的F2（孙代）后代中发现了结构性先天性异常（胎儿连体和四肢发育异常）。
总之，围产期暴露于低剂量的GBH会损害雌鼠生殖能力，并导致F2（孙代）胎儿发育迟缓和先天性结构异常。
María M. Milesiet al., Perinatal exposure to a glyphosate-based herbicide impairs female reproductive outcomes and induces second-generation adverse effects in Wistar rats.
Archives of Toxicology. June 2018;vol 92, pp2629–2643
María M. Milesiet al.，围产期接触草甘膦除草剂会损害在Wistar大鼠中雌性生殖结果并诱发第二代不良反应。毒理学档案。2018年6月；vol 92, pp2629–2643
https://link.springer.com/article/10.1007%2Fs00204-018-2236-6
证据29（2019年4月）：《自然杂志 - 科学报告》（Nature - Scientific Reports）发表华盛顿州立大学生物学学院生殖生物学中心Deepika Kubsad, Michael K. Skinneret al.团队《草甘膦诱发病理学及精子表观突变表观遗传的评估：跨代毒理学》确认：
祖辈环境暴露于各种因素和毒物已被证明能促进成人发病的表观遗传、代际遗传。世界上使用最广泛的农药之一为草甘膦除草剂(N-(膦乙基)甘氨酸)，知名品牌“农达”。关于草甘膦直接接触毒性（风险）的报道越来越多，但对代际作用没有进行严格的调查研究。
目前的研究中，对F0代（研究中最初代）雌性大鼠仅短暂暴露，发现（试验剂量）草甘膦对直接暴露的F0代或F1代（子辈）病理的影响可以忽略不计。与此相反，观察到F2代（孙辈）后代和F3代（曾孙辈）病理急剧增加。观察到的跨代病理包括前列腺疾病、肥胖、肾脏疾病、卵巢疾病和分娩（出生）异常。F1代（子辈）、F2代（孙辈）和F3代（曾孙辈）精子表观遗传分析鉴别到差异DNA甲基化区（DMRs）。许多DMR相关基因已被确认并已被证实与病理有关。...
因此，我们认为草甘膦可以诱导疾病和生殖系（如精子）的代际遗传。观察表明，在后代的疾病病因学中必须考虑草甘膦的代际毒理学。
以前的一些环境毒物的研究已经被证明可以导致代际遗传的病理、疾病和精子表观遗传的改变。这包括杀菌剂vinclozolin（烯菌酮、免克宁、灰霉利）[36, 37, 38]，塑料衍生化合物（双酚A和邻苯二甲酸酯）[39]、农药氯菊酯[40]、二氯二苯三氯乙烷（DDT）和甲氧氯[41, 42]、碳氢化合物（飞机燃料JP8）[43]、二恶英[44]，和除草剂阿特拉津（莠去津）[45]。
讨论
草甘膦是全世界最常用的农药，主要用于玉米、大豆和油菜籽中，补充图S1。 尽管有许多关于草甘膦潜在毒性的报道[12,13]，但监管机构则建议直接接触具有最小的毒性或没有毒性[10,11]。
最近的一项研究表明，草甘膦可导致暴露的大鼠的后代雌性生殖异常[27]。本研究提供了草甘膦对哺乳动物潜在的跨代影响的首次分析。妊娠期雌性动物的暴露同时直接暴露了F0（母代）雌性，F1（子代）后代以及F1（孙代）后代内的种系，这些种系将产生F2（孙代）的后代[45]。 因此，头一个跨代是没有直接暴露的F3（曾孙代）后代[55]，图7。
在F0（母代），F1（子代）和F2（孙代）代中直接暴露的作用机制与跨代种系介导的作用根本不同。尽管F2（孙代）的后代可以混合直接暴露和跨代的作用[29]，但在跨代F3（曾孙）代中首先观察到没有任何直接暴露，图7。对于雌性F0（母代）代妊娠期间短暂草甘膦暴露与未接受任何进一步暴露的后代的影响进行了评估。成年男性和女性的孕前暴露（例如通过饮食和汞含量异常）也显示出促进跨代影响[57,58]。当前的研究集中在妊娠期雌性的暴露作用上。
环境暴露对后代的影响可称为“跨代遗传毒理学”，表明祖先暴露可促进后代疾病和病理的发作。涉及的机制是通过种系的表观遗传改变进行表观遗传的跨代遗传。尽管许多暴露都可以影响直接暴露的个体以及跨代个体，但最近的观察表明，某些有毒物质或暴露对直接暴露的个体的影响可忽略不计，但可以影响从未直接暴露的后代。
例如，最近的一项关于除草剂阿特拉津（莠去津）的研究发现，对直接暴露的F0（母代），F1（子代）或F2（孙代）代的影响可忽略不计，但跨代F3（曾孙代）代的病态却增加了[45]。因此，对阿特拉津（莠去津）的经典毒理学分析表明直接暴露的风险微乎其微或低，因此该化合物的相对安全性，因为未考虑“遗传毒理学”。本研究对草甘膦可能具有类似的跨代作用的可能性进行了调查。
对草甘膦的直接作用分析表明，从产仔数、性别比或生育力的影响进行考虑，对F0（母代），F1（子代），F2（孙代）或F3（曾孙代）代没有明显的毒性，图S3。 F1（子代）后代在所分析的任何组织中的病理学都可以忽略不计。观察到的唯一影响是对雄性和雌性断奶时体重的影响，以及对雄性青春期延迟的影响。因此，对F0（母代）和F1（子代）代的经典毒理学分析表明，直接接触草甘膦导致的毒性或病理学可忽略不计。与此相反，源自直接暴露造成F1（子代）种系[29]的F2（孙代）后代雄性的睾丸疾病、肾脏疾病、肥胖症和多种疾病中显着增加（图1）。
F2（孙代）雌性的卵巢疾病、肥胖、乳腺肿瘤、分娩异常和多种疾病易感性也显着增加（图2）。
跨代F3（曾孙代）后代雄性的前列腺疾病、肥胖和单一疾病发生率增加，而雌性的卵巢疾病、肾脏疾病、分娩异常和多种疾病易感性增加，图1和2。
分娩异常是草甘膦暴露所观察到的独特病理，在以往的跨代研究中很少见[59]。在妊娠后期，超过30％的F2（孙代）雌性大鼠死于难产和/或凋落物死亡率。在父系F3（曾孙代）妊娠雌性大鼠中也可以看到这种情况，图2。尽管由于产科护理的改善，难产和分娩死亡率在当今人类中并不常见，但今天看到的早产率与婴儿异常等可能反映了观察到的潜在病理[60,61]。
此外，在F2（孙代）和F3（曾孙代）雄性和雌性鼠中观察到的肥胖率明显更高，这与过去几代中观察到的人类肥胖症急剧增加相关。
草甘膦跨代遗传诱导的许多病理学频率与当今人群的病理学频率相似，例如确定的40％肥胖症率。与在F0（母代）和F1（子代）代中观察到的病理学和疾病忽略不计相比，在F2（孙代）代和跨代F3（曾孙代）代雄性和雌性中观察到了显着的病理学。 因此，基于草甘膦暴露，跨代遗传疾病和精子表观遗传学改变的关联，我们提出草甘膦促进疾病的表观遗传跨代遗传。
Deepika Kubsad, Michael K. Skinneret al., Assessment of Glyphosate Induced Epigenetic Transgenerational Inheritance of Pathologies and Sperm Epimutations: Generational Toxicology. Nature - Scientific Reports, April 2019; Vol.9, Article No.6372
Deepika Kubsad, Michael K. Skinneret al., 草甘膦诱发病理学及精子表观突变表观遗传
的评估：跨代毒理学。自然杂志-科学报告，2019年4月；第9卷文章号6372
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